HPLC在抗体药物分析中的应用.pdfVIP

HPLC 在抗体药物分析中的应用 ——TOSOH 系列产品专题 抗体药物及重组蛋白等已经被广泛应用于治疗方面，因此蛋白质差异性的品 质管理工作极其重要，因为这些物质的聚合物、变性物质等都有可能导致过敏性 休克或免疫反应。高效液相色谱法（HPLC）可以对抗体药物以及重组蛋白等蛋白 药物的不均一性进行有效的分析，尤其当多种色谱分析方法有效组合时，可以更 好对蛋白药物进行定量和定性分析，除此还可使用分析检测方法有等电聚焦电 泳、氨基酸序列分析、MALDI-TPF MS、CD Spectrum分析及NMR分析。 蛋白药物的不均一性（差异性）  翻译后的修饰（酶的作用等） 磷酸化（脱磷酸化）、糖基化、脂质化、甲基化、乙酰化、多肽部分的酶切 等。  降解（酶的作用及非酶的作用） 蛋白酶的酶解、脱酰胺、氧化等。  其他 化学修饰（PEG化等）、变性、聚合等 抗体异构体出现的原因  氨基酸序列的不同（重组、转录异常）  氧化（Met，Trp）,C 末端 Lys 的分解，N 末端焦谷氨酸（Glu）,脱酰胺 化（Asn）。  二硫键结合的有无及S-S结合力的不同。  复合糖链的不同。 抗体异构体对药物性能的影响  免疫抑制效果  Fc效应功能  发烧等副作用  溶解性及保存稳定性（分解性） 色谱分析分离模式 1、尺寸排阻色谱法（SEC） 依据组分分子空间尺寸大小进行分离，主要用于多聚体、降解片段，PEG 化修饰蛋白等样品的分析。 例1 免疫球蛋白的分析 例2 抗体多聚体的分析 例3 酶解片段的分析（胃蛋白酶酶解片段及木瓜蛋白酶酶解片段） 胃蛋白酶酶解抗体的过程跟踪图谱 木瓜蛋白酶酶解抗体的过程跟踪图谱 例4 单PEG化蛋白的分析（PEG:5KDa） 例5 半抗原结合抗体片段的分析 2、离子交换色谱法（IEC） 依据样品带电性及电荷量的差异分离分析，如氨基酸残基不同、脱氨基 化、PEG化修饰、N末端和C末端的不同等。 例1单抗带电异构体的分