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第 27卷 第 6期 2008年 6月 种 子 Seed Vo l. 27 No. 6 Jun. 2008
两种方法对广玉兰 ISSR PCR 反应体系的优化比较
1 2 1 1 1 1 1
陈亮明 , 相 阳 , 张冬林 , 李志辉 , 陈永华 , 马 倩 , 彭 婧
( 1. 中南林业科技大学 资源与环境学院 , 湖南 长沙 4 10004;
2. 山东省济宁市园林管理局科研所 , 山东 济宁 272 100)
( 2 +
摘要 :采用单因子和正交设计 2 种方法 ,对影响广玉兰 ISSR PCR 反应体系的 5 个因素 Taq 酶 、M g 、dN TP、引模板
)
DNA 进行优化 。结果表明:正交设计采用直观分析法获得影响因素最佳反应水平与单因子试验找出影响因素最佳反应
μ
水平有一定差异 ,通过综合比较分析 ,最终建立了广玉兰 ISSR PCR 的最佳反应体系 :在 20 l的反应体系中 , TaqDNA 聚
2 +
μ
合酶 1. 0 U 、M g 1. 2 ～1. 5 mmol/L、dN TP 1. 80 mmol/L、引物 0. 5～0. 6 mol/L、30 ng模板 DNA 、10 ×PCR buffer。同时 ,通
过 PCR 比较 ,确定延伸时间为 2 m in,循环次数为 35个较为合适 ,确定了引物最佳退火温度 ,得到了广玉兰 ISSR PCR 反
应的最佳扩增程序 。
关键词 : 广玉兰 ; ISSR PCR; 单因子试验 ; 正交设计
中图分类号 : S 685. 15 文献标志码 : A 文章编号 : 1001 - 4705 (2008)
Comp arison on Two M ethod s of
Op tim ization of ISSR PCR R eaction System forM ag no lia g rand if lora
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CHEN L iangm ing , X IA NG Y ang , ZHA NG D onglin , L I Zh ihu i ,
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