ELISA法检测花生酱中AFB1样品前处理方法的改进研究.pdfVIP

维普资讯 第 34卷 ELISA法检测花生酱 中AFB1样品前处理方法的改进研 究 ·35 · ；谷物化学与品质分析l 蒂 蒂 蒂 蒂 蒂 蒂 蒂 蒂 蒂 ，F 蒂 蒂 蒂 ELISA法检测花生酱中 AFB1样品前处理方法的改进研究 蔡建荣 赵春城 赵晓联 (江苏省微生物研究所有限公司 无锡 214063) 摘 要 通过 ELISA法，对检测花生酱 中AFB 含量的前处理方法进行 了改进研 究。通 过对样品提取条件的优化 ，提取液稀释度的改变，建立了新的前处理方法，并利 用回收率的测 定与国标法进行比较 。结果表明：利用改进的提取方法处理花生酱样品，对常见浓度加标回收 率达 75％～120％。新的提取方法不仅 简化 了操作步骤 ，减少了工作量，又提 高了回收率。 关键词 酶联免疫吸附检测法 黄曲霉毒素 B1前处理方法 黄 曲霉毒 素 B1是 黄 曲霉 菌 (Aspergillus 1 材料与方法 flavus)或寄生 曲霉菌 (Aspergillusparasticus)的主 要次生代谢产物，在 自然界中广泛存在 ，它是 目前 巴 1．1 主要仪器与材料 知的 自然物质中致癌性最强的一种。虽然黄曲霉毒 酶标仪 ，MK3，雷勃公司 (芬兰)；微量振荡器 ， 素 B】(AFB】)在食品中的含量非常的低 ，一般只能达 MS2型，IKA(德 国)；恒 温培养箱 ，PYX—DHS(上 到t,tg／kg级 ，但是 由于它毒性剧烈，致癌性强 ，即使 海)；紫外分光光度计 ，Cintra10e，GBC科学仪器公 含量非常少 ，通过生物积累，也能引起人体器官癌 司(澳大利亚)；AFB 检测试剂盒 (无锡)；花生酱 ，购 变 ，所 以它在食 品中的安全 限量现在 已经 降到 于超市 ，产地分别为无锡、上海、重庆等。 15~／g／kg以下 【1】。随着人们生活水平 的提高 ，食 品 安全意识的增强 ，各种食品中黄曲霉毒素的检测也 1．2 样 品提取方法 越来越受到关注 ，自国家质检总局在2002年发文规 1、2．1 改进方法 准确称取 5．0g花生酱于 250 定 ，“米、面、油 、酱油、醋”五类食品必须实行市场准 mL具塞锥形瓶中，再准确 加入 25．0mL的甲醇 一 入制度L2J，2003年又发文规定对 肉制 品、乳制品、饼 水 (1：1)提取液 ，然后加入 20mL石油醚或正己烷 ， 干等 “十类 ”食 品必须实行市场准人制度 3【J，其 中 将瓶塞盖紧，水封后 ，在振荡器上振荡 30分钟 (700 AFB 是大部分食品的必检项 目之一。 r／rain)，用定性快速滤纸过滤于 125mL分液漏 斗 目前检测 AFB 主要有三种方法 ¨J：① 薄层法 中，静置分层 ，放出下层清液于25mL比色管中，定 (国标第一法 ，GBIT5009．22—2003)；② 酶联免疫 为样品提取液 1号。 法 (ELISA法)(国标第二法)；③液相色谱法 。其 中 1．2．2 国标方法 ¨ 参照 国标 (GB厂r5009．22— 薄层法样品处理繁琐 ，毒性大 ，灵敏度低 ，而液相检 2003)，准确称取20．0g花生酱于 250mL具塞锥形 测成本高 ，样品处理复杂 ，只有酶联免疫法 ，成本低 瓶 中，再准确加入 100mL的甲醇 一水 (55：45)提取 廉 ，灵敏度高 ，操作简便成为现在大多数检测机构所 液，然后加入 30m