桑色素对小鼠T细胞行为和DTH、脓毒症免疫调节作用的研究.pdfVIP

摘要 T DTH 桑色素对小鼠 TT 细胞行为和 DDTTHH、脓毒症免疫调节作用的研究 硕士研究生 臧宁 专 业 免疫学 指 导 教 师 曾耀英 研究员 暨南大学组织移植与免疫中心 中文摘要 目的： 研究桑色素对 T 细胞行为和 DNFB 诱导的 DTH、E.coli诱导的脓毒症模型的影响，并 探讨其作用机制。 方法： 分别使用刀豆蛋白 A(concanavalinA，ConA)和二丁酸佛波醇酯(phorbol 12,13-dibutyrate, PDB)加离子霉素(ionomycin, Ion)刺激小鼠淋巴结来源的 T 细胞活化和增殖，建立地塞米松 诱导胸腺细胞凋亡模型。研究桑色素(morin)对上述刺激剂所诱导的 T 细胞行为的影响，以 及对地塞米松诱导的胸腺细胞凋亡的影响。利用荧光标记抗体检测 T 细胞的表面分子，羧 基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester ,CFDA-SE)荧 光染料检测 T 细胞增殖，碘化丙锭(propidium iodide，PI)检测 T 细胞周期，PI测定地塞米 松(dexamethasone, Dex)诱导胸腺细胞凋亡的比率；建立二硝基氟苯(dinitrofluorobenzene, DNFB)诱导迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity，DTH)模型，观察 morin对 DTH 模型小鼠耳组织肿胀、炎性细胞浸润程度和胸腺指数、脾指数的影响，光学显微镜下观察 小鼠耳廓组织学变化，噻唑兰(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测淋巴结细胞和脾脏 淋巴细胞增殖情况；建立腹腔注射大肠杆菌(escherichia coli,E.coli)诱导脓毒症(sepsis)模型， 观察 7 天内 morin对小鼠存活率的影响，用 Annexin-V/PI 双染法检测淋巴细胞凋亡情况， Griess 法检测脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮(nitric oxide, NO)情况，荧光显微镜下观察和流式细胞术检测巨噬细胞吞噬情况。 结果： + 1. 终浓度为 25、50 和 100μmol/L 的 morin 均下调 ConA 刺激后的 CD69 T 细胞的比 I 摘要 率，其中，100μmol/L 的 morin抑制作用最强，下调比率为(48.95±0.81)%，与对照组比较 差异显著(P0.01)。CFDA-SE 染色分析显示，各浓度的 morin对 ConA或 PDB+Ion 刺激 48 h 或 72h的 T 细胞增殖，均具有明显地抑制作用，以 100μmol/L morin抑制作用最明显。PI 染色流式细胞术分析的结果表明，与 ConA或 PDB+Ion 组相比，morin组中 S期的细胞比 率较高。PI染色分析小鼠胸腺细胞凋亡的结果表明，25μmol/L、50μmol/L 100μmol/L morin 对 Dex 诱导的细胞凋亡有促进作用， 100 μmol/L morin 作用最强，凋亡细胞比率为 (42.10±3.06)%，与 Dex组相比，差异显著(P0.01)。 2. 双耳称重的结果显示,morin(70 mg/ml) 处理组与DTH组具有显著的差异(P0.05) , 能明显抑制 DNFB引起的炎症反应; 耳廓局部组织学检测也表明,morin能够抑制 DNFB诱 导的 DTH, 明显减少淋巴细胞的浸润。morin能降低 DTH 小鼠胸腺指数和脾脏指数，抑制 淋巴结淋巴细胞(P0.01)和脾脏淋巴细胞的增殖(P0.05)。 3.morin(35 mg/m