法医物证学 第8章 血清型.pptVIP

第八章 血 清 型 二 血清蛋白型的分类与命名 据分型原理不同，可分为两大类： 1 同种异型遗传标记 是指同一种属不同个体血清蛋白抗原性的差异，可采用特异性抗血清分型。包括：免疫球蛋白Gm、Km、Am以及低密度脂蛋白等。 这类血清型的命名多以抗原所在的肽链名称加抗原编号组成。 如Glm（1）抗原表示该抗原位于免疫球蛋白IgG1γ重链上的1号抗原 2 血清蛋白的电泳多态性遗传标记 是指不同个体血清蛋白的电泳特性的差异。是血清蛋白多肽链中部分肽链段或个别氨基酸不同，引起电泳迁移率发生变化构成的多态性 命名 通常是蛋白的缩写名称加表示等位基因的数字或字母，如Hp1-1 2 在法医学鉴定中应用的血清型多数属于电泳性质上的多态性，需要采用凝胶电泳技术分型 其分型原理为：不同表型的蛋白质一级结 构存在差异，分子量和等电点不同，在电 场中的迁移率不同，可依据蛋白谱带位置 进行分型 淀粉凝胶、SDS聚丙烯酰胺凝胶、等电聚焦分型 四 法医学意义 应用价值：在斑迹的鉴定中发挥了重要作用 逐步被DNA分型技术取代， 血清蛋白多态性与DNA遗传标记相比，基因重组率低，突变率低，在亲子鉴定中仍有应用价值。 HP1-1型的电泳谱带呈现单一成分，泳动最快，靠近正极侧 HP1-2和HP2-2型由多个成分组成，电泳迁移率较小，其谱带浓度向负极呈逐渐递减趋势 4 HpJ－1型 此型的特点是1－1区的电泳带分裂为两条，负极侧谱带增多 为Hp2-1型变异性 5 HpK－1型 此型的特点是1－1区的电泳带分裂为两条，其余区域无蛋白带 为Hp1-1型变异型 　　　　　图1 聚丙烯酰胺凝胶不连续圆盘电泳示意图　　　　　　　　(A为正面,B为剖面)　1样品胶pH6.7 　2浓缩胶：是大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7的Tris-HC1　3分离胶；是小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1　4电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液 （一）普通型可采用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳分型。 电泳前先使待测样品与血红蛋白形成Hp－Hb复合物。电泳完后可以利用血红蛋白的过氧化物酶活性在过氧化氢存在时使联苯胺氧化成联苯胺蓝，染色。 血痕的分型效果不理想 Hp在血痕中较稳定，保存时间长(18月)，但由于血痕中大量的血红蛋白仅少部分与Hp结合，大部分以游离形式存在，电泳中Hb占凝胶的大部分，联苯胺染色时，过多的血红蛋白可掩盖Hp泳谱，无法分型。 （二） Hp亚型等电聚焦电泳分型 先纯化样品中的Hp，再使Hp组分中的α肽链变性，还原后方能采用普通电泳或等电聚焦技术进行分型。 考马斯亮蓝染色 免疫印迹 电泳后采用蛋白吸印加酶联免疫分析技术可检出浓缩3000倍的人尿液中的HP普通型 免疫电泳(immunoelectrophoresis, IEP)是将区带电泳和双相琼脂扩散相结合的一种免疫化学分析技术。 。 原理 先将待检标本在琼脂凝胶中进行电泳,不同的抗原成分由于所带电荷、分子量及分子构型的差异，在电场作用下的泳动速度不同而被分成不同区带。 然后与电泳方向平行，挖一小槽，加入含相应抗体的免疫血清，与已分离的各抗原成分在琼脂内作双相免疫扩散，各区带在相应位置与抗体形成沉淀弧。 根据沉淀弧的数量、位置和形态，可分析样品中所含抗原成分及其性质。 Gc的聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳条件：凝胶 浓度为5.8％、交联度为2.14％。Tris-甘氨酸缓冲液作为电极液，于3mA下电泳2h， 普通蛋白染色，Gc位于白蛋白与转铁蛋白 之间。 采用等电聚焦电泳可以检出Gc亚型， 支持介质采用浓度 5％、交联度为3％聚丙烯酰胺凝胶，两性电介质pH为4.5－5.4，电压为500V，样品加于距负极10mm处，电泳1h。 电泳结束后用抗－Gc血清免疫固定，再行蛋白质染色后观察结果。 第四节 血清类粘蛋白型 血清类粘蛋白（ORM）：是存在于人类血 液、体液、分泌液中的一种具有遗传多态 性的α1糖蛋白。 一、ORM的生化性质与生物学功能 由肝脏及淋巴细胞合成，血清中的含量为0.6－1.2g/l。在人类血浆蛋白中，ORM是含糖量最高、酸性最强的糖蛋白。 ORM的肽链结构中富含脯氨酸，具有较高的稳定性和耐热性 人类ORM蛋白为单一肽链，含183个氨基酸残基。主要有两种分子，ORM1和ORM2 具有微观不均一性：每条ORM1分子上连接有5条糖侧链，糖侧链为双分枝、三分枝或四分枝的复杂型糖链，同一个体相同的ORM1分