线粒体ATP 敏感钾通道调控哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖[J].pdfVIP

生理学报 Acta Physiologica Sinica, February 25, 2009, 61 (1): 65-71 65 研究论文 线粒体 ATP 敏感钾通道调控哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖 * 赵建平 ，高敏，叶永军，胡伟华，周志刚，胡红玲 华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸疾病研究所，武汉 430030 摘 要：本文旨在探讨线粒体ATP 敏感钾(mitochondrial ATP-sensitive K+, MitoKATP)通道对哮喘大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells, ASMCs)增殖的影响及其调控机制。36 只Sprague-Dawley (SD)大鼠随机分为哮喘组(n=18) 和正常组 (n=18) ，哮喘组大鼠采用卵清蛋白(ovalbumin, OVA)致敏及激发的方法制备哮喘模型，正常组大鼠吸入等量生理盐水。取 各组大鼠肺组织，分离出ASMCs 进行培养，将样本分6 组分别进行干预：(1) 正常组；(2) 正常 + MitoK A TP 通道开放剂 diazoxide 组(diazoxide 组)；(3)正常 + MitoKATP 通道阻断剂5-HD 组(5-HD 组)；(4)哮喘(asthma)组；(5) asthma + diazoxide 组； (6) asthma + 5-HD 组。利用罗丹明(Rhodamine123, R-123)荧光染色、激光共聚焦显微镜成像检测线粒体膜电位(ΔΨm) ， DCFH-DA 荧光染色法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)含量，RT-PCR 检测核因子κB (nuclear factor-κB, NF- κB) mRNA 的表达，流式细胞仪检测细胞凋亡和MTT 法检测细胞增殖情况。结果显示：(1) Diazoxide 组与正常组相比， R-123 荧光强度增强，ΔΨm 去极化，ROS 及NF-κB 的表达增高，细胞增殖增多、凋亡减少(P 0.05)；而5-HD 组与正常 组相比，上述指标均无显著差异；(2) 与正常组相比，Asthma 组R-123 荧光强度增强，ΔΨm 去极化，ROS 及NF-κB 的 表达增高，细胞增殖增多、凋亡减少(P0.05)；Asthma + diazoxide 组与Asthma 组相比，R-123 荧光强度和ΔΨm 去极化 增强，ROS 及NF-κB 表达增高，细胞增殖增多、凋亡减少(P 0.05)；Asthma + 5-HD 组与Asthma 组相比，R-123 荧光 强度和ΔΨm 去极化减弱，ROS 及NF-κB 表达降低，细胞增殖减少、凋亡增多(P0.05)；(3)各组大鼠ASMCs 的R-123 荧 光强度，NF-κB mRNA 表达量与ROS 含量均呈正相关；MTT 的吸光度值与NF-κB mRNA 表达量呈正相关，凋亡细胞百 分比与NF-κB mRNA 表达量呈负相关。以上结果提示，哮喘可引起大鼠ASMCs 的MitoKATP 通道开放及ΔΨm 去极化，ΔΨm 去极化促进ROS 的表达，ROS 可能作为信号分子刺激NF- κB 表达增加，进而促进ASMCs 增殖，参与气道重构。 关键词：哮喘；线粒体膜电位；线粒体A T P 敏感钾通道；活性氧；核因子κB ；平滑肌 中图分类号：R33 2 ；R562 .2 + 5 Regulation of rat airway smooth muscle cell proliferation by mitochondrial ATP-sensitive K+ channel in asthmic rats * ZHAO Jian-Ping , GAO Min, YE Yong-Jun, HU Wei-Hua, ZHOU Zhi-Gang, HU Hong-Ling Department of Respiratory Medicine, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, China