实验4-电子教案酪氨酸酶的提取及其酶促反应动力学研究.pptVIP

2005-11 实验特色 一、实验目的 二、实验原理 二、实验原理 二、实验原理 二、实验原理 二、实验原理 二、实验原理 三、仪器和试剂 四、实验简要步骤 五、注意事项 六、结果和讨论 同学们在实验中发现问题请及时与老师共同讨论！实验开始…… 综合化学实验 化学化工学院 实验4-电子教案 酪氨酸酶的提取及其酶促反应 动力学研究 实验对象：酶——天然的生物催化剂 内容：提取、催化及动力学研究 一种新的数据处理方法——最小二乘法 一、实验目的 二、实验原理 三、仪器和试剂 四、实验步骤 五、注意事项 六、结果和讨论 认识生物体中酶的存在和催化作用 了解酶促反应的特点 初步了解最小二乘法的基本思想，学会利用最小二乘法对实验数据进行简单处理 酶的本质： 生物细胞合成的、对特定底物（Substrate)起高效催化作用的蛋白质，是生物催化剂 酶的特点： 主要成分——蛋白质，是生物催化剂 活化能较低 催化效率高 高度的专一性 酪氨酸酶催化 多巴(DOPA) 的氧化反应： 酶促反应的过程及处理： 米氏方程及米氏常数： 当K2 K3 时，米氏常数Km可看成是 ES 的离解常数，也可以作为衡量酶与其底物结合力的尺度，Km值越大，表示酶与其底物的结合力越小，反之，则越大。对每一个酶 - 底物体系来说，Km是一个特征值，它与酶的浓度无关，但与pH、温度及其他外在因素有关。Km的物理意义是：当酶促反应速率达到最大反应速率一半时的底物浓度，单位是mol/L。 最小二乘实验数据拟合： 以线性模型y = ax+b 为例： 为确定回归系数a和b，通常采用最小二乘法，即要使 Q=[yI - (axI+b)]2达到最小。 根据极值原理，a与b应满足下列方程： [yI - (axI+b)]（-xI）=0 [yI - (axI+b)]（-1）=0 最小二乘实验数据拟合： 数据拟合处理工具： Excel 电子表格 回归 规划求解计算示例 Origin 注：本实验公共电子邮箱 pei-wei@163.com 分光光度计，离心机，研钵，水浴，秒表。 pH = 6.8的磷酸钠缓冲溶液；1 - 多巴（左旋多巴，二羟基苯丙胺酸）溶液（~ 10 mmol/L）；铜试剂（二乙基二硫代氨基甲酸钠），用缓冲液配置成10-3 mol/L；土豆（或苹果）。 本实验测定速率——反应初速率（1 min时的平均速率） 注意：掌握操作时间 溶液的配制——采用缓冲溶液为溶剂 注意：防止多巴氧化 了解酶催化反应的特点——观察实验现象 注意：反应温度的控制和酶的加入 掌握实验仪器的使用 注意：高速离心机的安全使用 实验结果 坐标纸作图与最小二乘法拟合的实验数据比较 实验讨论 实验操作和现象的回顾与总结 实验结果的得出和结论 文献资料的查阅和理解