16通道毛细管阵列电泳对手性氨基酸分离条件的快速筛选.pdfVIP

第34卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究简报 第2期 2006年2月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 267~269 16通道毛细管阵列电泳对手性氨基酸分离条件的快速筛选 汪 俊’ 孙光明 王 利 白吉玲 (中国科学院大连化学物理研究所分子反应动力学国家重点实验室，大连 116023) 摘 要 利用自行研制的16通道旋转激光扫描共焦荧光检测式毛细管阵列电泳仪，我们采用了不同浓度的 十二烷基硫酸钠沙环糊精、7一环糊精对荧光素标记丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸和谷氨酸4种手性氨基酸进行 了手性拆分条件研究，快速地获得了这4种手性氨基酸对映体最佳的拆分条件:分离缓冲液为10mmol/L硼 酸缓冲液(pH二10),5mmol/Ly一环糊精为添加剂时，4种手性氨基酸全部达到了基线分离。 关键词 毛细管阵列电泳，手性氨基酸，环糊精 1 引 言 手性化合物就是化合物的结构具有左右手对称的性质。它们的物化性质非常相似，用一般的方法 难以分离。其中手性氨基酸在人体及动物生命活动中起着举足轻重的作用，如人体必需的氨基酸，只 有L(S)型氨基酸才能被吸收，与生命科学紧密相关的手性氨基酸同人类某些疾病的发生发展有密切 的关系，近几年来已成为研究的热点川。 目前手性氨基酸的分离方法主要有毛细管电泳、高效液相色谱和薄层色谱等。由于毛细管电泳技 术高效、快速、方便，特别是可以通过改变添加剂的浓度、加人有机溶剂等方法极为方便地改变体系的选 择性和分离效率，显示了很多HPLC所不及的优越性，具备了成为手性分离常规技术的各种条件，将在 今后一段时间继续成为相关领域的研究热点[[2l。采用高通量毛细管电泳即毛细管阵列电泳可以在不 同的条件下以最短的时间优化出好的分离条件，而且可以进行多样品分析。 本实验采用自行研制的新型多通道旋转激光扫描共焦荧光检测式毛细管阵列电泳仪[[3,41，对荧光 素异硫氰酸fa(FITC)标记的4种手性氨基酸进行手性拆分研究，快速地获得了较好的分离结果，实验 研究表明，这种设计在组合筛选手性对映体的拆分条件方面具有快速、便捷、高效及高通量等优点。 2 实验部分 2.1仪器与试剂 旋转激光扫描共焦荧光检测式毛细管阵列电泳仪(自制)[4,51:本仪器采用8位精度编码器，圆周可 划分为256等分，毛细管放置在固定的角度上，编码器每转过一个角度就发出一个触发信号并给出角 度信息触发数据采集。毛细管内样品产生的荧光信号由光电倍增管采集，并由数据采集卡完成记录、存 储，因此角度、毛细管、荧光信号可以实现一一对应。手性丙氨酸(DL-Ala)、手性甲硫氨酸(DL-Met)、手 性色氨酸(DL-Trp)、手性谷氨酸(DL-Glu)、十二烷基硫酸钠(SDS),y一环糊精(y-CD),8一环糊精(,8-CD)、 荧光素异硫氰酸醋(FITC)以及硼砂等均为分析纯。实验用水为蒸馏水。 2.2 实验方法 将氨基酸溶于硼砂缓冲液(10mmol/L,pH二10)中配制成1.0mmoUL的标准溶液，取1mL，加人 5匹0.1%的毗陡丙酮溶液，再加人3X10一m‘oULFIX丙酮溶液，于暗处室温静置过夜[[5,61。进样时 稀释到10一’moUL, 石英毛细管的总长为26cm，内径50}Lm，检测窗口到进样端有效长度为23cm，采用毛细进样，进 样时间为20s，分离电压采用6.0kV。在每组样品测定之间依次用0.1mol/LNaOH,HZ0，分离缓冲液 冲洗5min 2005-03一 收稿;2005-06-09接受 分析化学 第34卷 3 结果与讨论 3.1 多通道之间重复性及可比性 为考察多通道之间拆分效果的可比性及检测系统的重复性，实验先利用16通道毛细管阵列电泳只 进荧光染料FITC,16通道采用相同的分离条件，即:采用毛细进样，进样时间为20s，分离电压采用6.0 kV，分离缓冲液为10mmoUL硼砂缓冲液(pH二10).16通道毛细管阵列电泳谱图的横坐标为采样点 数，每100()个点为一个通道，一共为1600()个点共16个通道。实验结果表明，本仪器各通道之间的荧 光强度有差异