183;研究论文183;高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp4的.pdfVIP

中国动物传染病学报 　2009 ,17 (3) :2 1 - 26 　 Chinese J our nal of Animal Infectiou s Di sea se s ·研究论文 · 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白 Nsp4 的表达及其抗血清的制备 1 1 1 1 1 1 1 1 许傲天 ,周艳君 ,李国新 ,于 　海 ,闫丽萍 ,陈宗艳 ,张善瑞 ,王礞礞 , 1 1 2 1 姜一峰 ,王亚欣 , 田志军 ,童光志 (1 . 中国农业科学院上海兽医研究所 ,上海 200241 ; 2 . 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 　兽医生物技术国家重点实验室 ,哈尔滨 150001) ( 摘 　要 : 根据 GenBank 中已发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 Highly Pat ho genic Porcine Rep roductive and Respiratory Syndrome Viru s ,PRR SV) HuN4 株全基因组序列 ,设计合成一对引物 ,对 PRR SV HuN4 株非结构 蛋白N sp 4 (Non st ruct ural p rot ein 4 基因进行 R TPCR 扩增 ,克隆到原核表达载体 p E T30a ( + ) 中 ,构建重组表达载 ( ) 体p E T30aN sp 4 ,经酶切测序鉴定 。将p E T30aN sp 4 转化表达菌株BL 2 1 D E3 ,诱导可表达分子量约为 27 kDa 重 ( ) 组蛋白。West ern blot 显示其具有较好的反应原性 ,经镍离子亲和层析 NiN TA 纯化获得了高纯度的可溶性重组 蛋白。将纯化的N sp 4 蛋白免疫BALB/ c 小鼠,抗血清 EL ISA 效价达 1 ∶16 000 ,West ern blot 和 IFA 表明 ,所制备 的抗血清能够特异性识别 PRR SV 自身表达的 N sp 4 蛋白。本研究获得了可溶性的 PRR SV N sp 4 蛋白,制备了 N sp 4 特异性多抗血清 ,为进一步研究 N sp4 蛋白的亚细胞定位及功能奠定了基础 。 关键词 : 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 ; N sp4 ; 原核表达 ;多抗血清 中图分类号 : S852 . 659 . 6 　　　　　　文献标识码 : A 　　　　　　文章编号 : 1674 - 6422 (2009) 03 - 002 1 - 06 PRO KARYOTIC EXPRESSION OF NONSTRUCTURAL PROTEIN 4 ( NSP4) OF HIGHLY PATHOGENIC PORCINE REPROD UCTIVE ANDRESPIRATORY SYNDROME VIRUS AND CHARACTERIZATION