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第 29卷 ，第 6期 光 谱 学 与 光 谱 分 析 Vo1．29，No．6，pp1599—1602 2009年 6月 SpectroscopyandSpectralAnalysis June，2009 铕一吡哌酸时间分辨荧光法检测 DNA含量 刘 珍 ，孙思玲 ，李 锋，徐淑坤 东北大学化学系，辽宁 沈阳 110004 摘 要 在 pH值为7．2的Tris—HC1缓冲溶液中，铕与吡哌酸反应形成配合物。该体系中加入鲱鱼精DNA 分子作用后荧光强度显著增强，并且在一定浓度范围内，DNA浓度与其荧光强度呈 良好的线性关系，据此 建立了一种简单的测定 DNA的时间分辨荧光分析新方法。考查 了体系的时间分辨荧光光谱，通过与普通荧 光光谱的对 比突显了采用时间分辨荧光法的优势，并对反应条件进行 了优化。该方法对DNA 的检测限为 0．03mg·L (3)，对浓度为4．0mg·L 的DNA进行 11次平行测定 ，其相对标准偏差为0．3 。DNA的 浓度在0．1～6．0mg·L 范围内与荧光强度呈 良好的线性关系，线性方程为：AI=89．58c(mg·L )+ 0．9205，线性相关系数 r=O．9996。此方法 已应用于合成样 品中DNA的测定，结果和加标回收率令人满 意。 关键词 铕一吡哌酸；荧光探针；时间分辨荧光法；鲱鱼精DNA 中图分类号：065 文献标识码：A DOI：10．3964／j．issn．i000—0593(2009)06—1599—04 法，以铕一吡哌酸配合物为荧光探针定量检测 DNA。 引 言 1 实验部分 DNA的研究在生物化学、生物技术及药物研究等方面 都非常重要。目前 已经有文献报道将不同的仪器方法用于 1．1 仪器与试剂 DNA测定 ，例如分光光度法_1【]、流动注射荧光分光光度 LS-55荧光光度计 (PerkinElmer公司)；PHS-3C数字式 法2『]、电化学法l4]及瑞利共振散射法l6等。就荧光分光 pH计(上海理达仪器厂)；吡哌酸对照品(中国药品生物制品 光度法而言，由于DNA本身的荧光很弱，直接应用DNA 的 检定所)；吡哌酸标准贮备液：准确称取 0．0357g吡哌酸对 荧光发射光谱对其进行研究很受限制。因此 ，用金属离子配 照品，用少量0．1otol·L 盐酸溶解后 ，定容至 100mL容 合物作为荧光探针来标记和测定 DNA越来越得到人们的关 量瓶中，配制成 1．00×10 otol·L_1的标准贮备液 ，于 4 注，例如：8一羟基喹啉的金属络合物 9【]、钴 (IlI)一邻菲咯啉络 ℃冰箱中保存 ，使用时根据要求稀释至所需浓度；Eu203含 合物 1『、Eu(HI)一四环素络合物l1l_等。稀土配合物荧光的许 量大于99．999 (包头京瑞新材料有限公司)；铕离子标准贮 多独特优点，如窄带发射、荧光寿命长、Stokes位移大等， 备液：准确称取o．3610gEuz03，用少量HCI(1+1)水浴加 使它更适合作为荧光分析中生物分子的荧光标记物_1 。 热溶解，定容至 100H1L容量瓶中，配制成 0．020otol·L_1 ‘时间分辨荧光法 [1“ 是在普通荧光分析基础上发展起 的标准贮备液，于4℃冰箱中保存 ，使用时根据要求稀释至 来的一种新的荧光分析法，它采用稀土离子作为荧光示踪 所需浓度；DNA (HerringSperm)，(Sigma)：称取0．1014g 物，利用其发射峰窄、荧光寿命长(1o～1000Us)等特点，延 鲱鱼精DNA，溶于0．05mol·L NaC1中，定容至 100mL 迟测量时间，待本底短寿命荧光消失之后，才对配合物的长 容量瓶中，超声振荡，4℃冰箱中保存 7d，这期间偶尔