TIRFM在纳米粒子近壁浓度测量中的应用.docVIP

TIRFM在纳米粒子近壁浓度测量中的应用 王绪伟 李战华( 中国科学院力学研究所非线性力学国家重点实验室，北京 100190 摘要：?200nm粒子的浓度分布，并与经典的Boltzmann公式进行比较。 引言 Aranuld Serge（2008）利用粒子的细胞表面的受限运动理论绘制了细胞表面形貌变化；郑旭等（2009）使用Micro-PIV实验测量微流道壁面的滑移长度，发现示踪粒子浓度在管道壁面的非线性分布可能引起表观滑移长度偏大。近几年发展的全内反射隐失波（TIRF）技术照明范围在距离壁面500nm以内，z向分辨率可达0nm，可有效用于近壁区粒子浓度分布测量。 TIRFM测量距玻璃表面500nm以内的?20粒子浓度分布。 TIRF原理 Snell透射定律：光从介质1进入介质2时，折射率与入射角折射角的乘积守恒），用数学表示为 图1 TIRF原理 其中n1和 n2为介质1和介质2的折射率，?1和 ?2分别为光线入射角和折射角。当折射角?为90o时，没有光进入介质2,称为全反射，的入射角称为临界角 水的折射率1.33，玻璃.52，可以得到临界接触角?为61.4度。对给定的物镜，数值孔径 (3) 对100X NA=1.45的油镜，最大入射角为72.5度。入射角范围为时，绝大多数光发生全反射，有一部分光以平行界面的方向传播，称为隐失波。TIRF照明厚度内光强分布为： 其中穿透厚度 (5) 其中?为激发光的波长。对532nm激光，对应于不同的入射角，穿透厚度范围为：72～340nm 入射角与调节器刻度的关系 入射角的大小是TIRF照明器的调节器控制的。给出角与调节器之间的关系为 (6) 其中a和b分别为光束平行于物镜折射和有一定偏斜折射时的刻度，f为物镜焦距（为3）。但中发现，a和b的实验系统我们重新标定了调节器与入射角??的关系，如图所示。 ??=0.38b-7.3 (7) 穿透深度与z向分辨率 根据公式(3)，通过测量粒子光斑的光强I(z)可以得到粒子在z向的位置，从而实现对粒子的三维追踪。根据误差传递，z向定位的误差： (8) 对于粘附在壁面的粒子，光强I0=5000时，?Io=400，可得入射角?=61.4°时，误差?z=31nm。 实验与 实验装置包括Olympus IX71倒置荧光显微镜，配有数值孔径NA=1.45的100倍TIRF照明器IX2（Olympus）激光器Compass 315M（Coherent）图像采集用DU885 EMCCD(Andor)实验用直径200nm的Polystyrene 荧光粒子 (Invitrogen)，粒径的误差2%。在超纯水(Miipore)中稀释至体积分数约为10-5荧光粒子的实验溶液配置好后510min内开始实验。将约50?L含纳米荧光粒子的溶液滴到载玻片上，液滴的直径约3mm。用CCD记录液滴中荧光粒子bin2模式下图幅为501×502像素，像素尺寸为160nm/pixel。在同一平面内，观测5-7个位置每一空间位置连续拍摄50帧图片，连续两帧的时间间隔Δt为24.05ms,其中包括图像曝光时间(3ms)和图像传输时间。实验持续时间为2025min。用3个液滴重复上述实验。环境的相对湿度为40%-50%，每次实验中，湿度偏差小于±4%。实验温度在22-23.5℃±0.1℃，单次实验过程中温度变化小于±0.3℃。 图3. 物镜型TIRF照明实验示意图 图4. TIRF照明下200nm粒子图像 近璧粒子浓度测量 (9) 其中kB为Boltzmann常数，T为绝对温度，ψ0为固体表面电势，?D为Debye长度。 在电势场ψ中，点电荷的浓度分布服从Boltzmann分布 (10) 其中qp为粒子表面电荷量。 TIRFM测量结果 我们对?200nm的粒子在近壁面的浓度进行测量，3次实验得到的结果如图5所示。左图为原始数据，其中各次实验测差异是由于每次配液中浓度不尽相同。为了显示粒子-壁面相互作用的效果，我们使用500-600nm切片厚度内粒子数密度的均值对原始数据分别进行归一化（右图），可以看出它们的规律一致。 图5 粒子浓度沿着z向的分布。(L)归一化前, (R)使用最后5个数据的均值归一化 与理论Boltzmann分布的比较 理论上，超纯水中的Debye长度在考虑pH影响时为150nm[7