基于新型HRP底物白藜芦醇和AgSiO2纳米粒子的酶联荧光免….pdfVIP

中国科学 B 辑 :化学 2008 年 第 38 卷 第 6 期 : 511 ~ 517 SCIENCE IN CHINA PRESS 基于新型HRP 底物白藜芦醇和Ag/SiO2 纳米粒子 的酶联荧光免疫传感体系 * 龚福春, 曹忠, 谭淑珍, 谭亚非, 何小川 长沙理工大学化学与环境工程学院, 长沙 410076 * 联系人, gfc139@ 收稿日期: 2007-05-26; 接受日期: 2007-07-25 国家自然科学基金(批准号:和湖南省自然科学基金资助 摘要 以一种纯天然产物——白藜芦醇(resveratrol, RST)作为辣根过氧化物酶(HRP)荧光 关键词 底物运用于酶联荧光免疫传感体系. RST 对HRP, H2O2 的荧光响应性能优于传统HRP 荧光 白藜芦醇 底物, 诸如对羟苯丙酸、Amplex Red 和佳味醇. RST 本身只有极弱的荧光, 在HRP 催化下 HRP 新荧光底物 可被H2O2 氧化成二聚体产物, 该二聚体在315 nm 的激发光下能发射波长为462 nm 的强荧 Ag/SiO2 纳米粒子 传感体系 光, 并且反应体系的荧光强度增加值与 HRP 量在一定浓度范围内成线性相关. 根据此关系 日本血吸虫抗体 和竞争型免疫定量原理, 以日本血吸虫抗体(SjAb)为模型分析对象, 建立了基于新 HRP 荧 光底物的酶联荧光传感分析新方法. 运用制备的传感装置测定 SjAb 的线性范围为 −6 −4 −6 −6 1.5×10 ∼7.3 ×10 g/L, 检出限为 1.5×10 g/L, 测定浓度为5×10 g/L SjAb 的相对标准偏差 为 4.7%(n = 10). RST 的二聚体产物水溶性很低, 通过该装置可将酶反应产物沉积在具 Ag/SiO2 纳米粒子的传感界面上, 利用纳米 Ag/SiO2 对产物吸附富集作用, 不仅解决了传统 方法不便于测定低水溶性的产物的问题, 而且提高了分析灵敏性. 免疫分析方法的建立和发展是生物化学分析领 化学、化学/ 电化学发光等检测方法测定这些酶催 域重大成就之一. 该方法成为了临床诊断、食品和药 化产物的光谱信号、电化学活性等, 间接测定抗体/ 物分析以及环境化学等领域中最常用的分析方法之 抗原或半抗原. 因此, HRP 测定的关键是底物体系的 一, 已被广泛应用于药物、激素、蛋白质以及抗体鉴 选择. 定; 病毒、细菌、毒物等的定性定量分析中 [1,2]. 酶联 免疫分析方法所使用免疫组分的特异性反应保 免疫分析由于将酶的催化放大作用与免疫反应的特 证了其极高的选择性, 由于受检测技术限制, 其灵敏 异性结合, 使得免疫分析的灵敏度大大提高, 因而在 度往往不能满足实际需要. 酶联荧光免疫分析由于 实际中获得了较广泛的应用. 辣根过氧化物酶(HRP) 将高灵敏度的荧光检测技术与酶催化反应的化学放 [3] 基型酶联免疫分析是其中应用最成功的方法之一 . 大效应相结合, 为提高免疫分析灵敏性提供了较大 该方法的基础是HRP测定, 它通常利用HRP-抗体/抗