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业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2005,13 (3): 282~287
·研究论文·
马铃薯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶小亚基
基因( ) 的克隆及其在毕赤酵母中的表达*
宋波涛 柳 俊** 谢从华 成善汉
(华中农业大学园艺林学学院，国家蔬 改良中心华中分中心，园艺植物生物学教育部重点实验室，
湖北省马铃薯工程技术研究中心，武汉430070)
： ，从低
摘要 用RT-PCR 结合RACE 的方法，在腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶小亚基基因( )的保守位点设计 1 对引物
温处理的马铃薯( L.)块茎cDNA 中，扩增出 1 条约 1.9 kb 的特异性条带，并将其克隆到pBluescript SK 载
。 ，目标片段为 ，编码 。
体 DNA 序列测定结果表明 ，全长为 1 854 bp ，包含一个 1 563 bp 的开放阅读框架 521 个氨基酸 5 端
有63 bp 的非翻译区，3 端包含219 bp 的非编码序列，3 端poly(A)尾端上游 12 和19 bp 处有加尾信号AATAAA 。该基因已在
GenBank注册，登记号为AY 186620。将该基因PCR 突变后，克隆到酵母表达载体pMET琢-B 中，构成表达载体pMET琢A4 ，将其
线性化，用电穿孔法导入 - pMAD 16，得到重组表达酵母，经甲醇诱导表达后，SDS电泳显示，在诱导表
达重组酵母中检测到50 kD 左右的特异蛋白带。裂解酵母菌体提取蛋白质，进行酶活力活性测定，结果表明诱导表达重组酵母
中AGPase 活性明显上升，证明诱导表达成功。
：
关键词 马铃薯 克隆; 酵母表达; 酶活性
Cloning of the Small Subunit cDNA of ADP Glucose Pyrophosphorylase
from Potato and Its Expression in Yeast
SONG Bo-Tao LIU Jun** XIE Cong-Hua CHENG Shan-Han
(
)
The complete cDNA from potato ( L.) tuber of clone JH stored in low temperature was ampli-
fie
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