应用直接测序法测定结核分支杆菌rpsL基因突变的研究.pdfVIP

2·02 · 中国抗生素杂志1999年6月第24卷第3期 应用 PCR- 直接测序法测定结核分支杆菌 rp sL 基因突变的研究 吴雪琼 　张俊仙　庄玉辉　张军芝　贾树林 (解放军309医院, 　北京100091) 　　摘　要　 目的: 了解我国结核分支杆菌耐链霉素(Strep tom ycin, SM ) 分离株 rp sL 基因突变情况, 建立快 速检测结核分支杆菌耐药基因型的分子药敏试验方法。方法: 通过聚合酶链反应(Po lym erase Chain R eaction , ) 单链构象多态性 ( , ) 、 限制性片段长度多态性 PCR Single stranded Confo rm ation Po lymo rph ism SSCP PCR ( , ) 和 直接测序法( , ) 分析38株结 R estriction F ragm ent L ength Po lymo rph ism R FL P PCR D irect Sequencing D S 核分支杆菌耐 分离株的 基因。结果 38株耐 分离株中, 25株 异常、不被 消化、 分 SM rp sL SM SSCP M bo D S 析43位密码子 → 突变; 1株 异常、可被 消化、 分析33位密码子 → 突变; AA G A GG SSCP M bo D S GTA A TA 12株 正常、可被 消化、 分析未见异常; 未发现88位密码子突变。结论: 大多数结核分支杆菌耐 SSCP M bo D S 是由于其 基因43位密码子突变所致, 采用 、 和 方法可快速测定部分 SM rp sL PCR SSCP PCR R FL P PCR D S 结核分支杆菌 SM 耐药基因型。 关键词　聚合酶链反应; 　单链构象多态性; 　限制性片段长度多态性; 　直接测序法; 　药物耐受性; 　 结核分支杆菌 　　结核病的耐药问题已引起国内外广大结核防治工 采用本室自制的标本前处理试剂盒提取DNA , 置 作者的高度重视, 结核分支杆菌耐药分子机制的研究 - 20 ℃保存备用。 正在不断深入, 目前已阐明大多数结核分支杆菌分离 1. 3　PCR 扩增 株耐 是由于其核糖体 12蛋白基因( ) 突变所 扩增试剂盒为本室自制产品。在25 反应体 SM S rp sL PCR l 致, 其突变位点主要是43位密码子, 该位点有限制性内 系中, 4 种 的终浓度各为0. 2 , 引物