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210 2008, Vol. 29, No. 02 食品科学 ※生物工程
乙醇脱氢酶I基因敲除的酿酒酵母重组菌
构建的初步研究
葛菁萍，宋 刚，孙宗祥，凌宏志，蔡柏岩，刘松梅，平文祥*
(黑龙江大学 微生物黑龙江省高校重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150080)
摘 要：本实验根据酿酒酵母乙醇代谢途径，构建一株低乙醇产量的酿酒酵母基因工程菌株，以满足人们对低醇
啤酒的需要。利用抗性基因筛选基因敲除突变体的方法，通过引物L1和L2扩增潮霉素B基因(两翼与酿酒酵母同
源)，按常规醋酸锂法转化酵母细胞后，筛选标记与酵母adh I基因发生同源重组，得到一株ADH I酶活性降低的
工程菌株。发酵实验结果表明，转化菌株乙醇含量平均值为1.8%(V/V)，较原始菌株低了65%。说明转化菌株体
内乙醇生成途径受到干扰。
关键词：酿酒酵母；基因敲除；乙醇脱氢酶I
Preliminary Study on Deletion ofSaccharomyces cerevisiae
GE Jing-ping，SONG Gang，SUN Zong-xiang，LING Hong-zhi，CAI Bai-yan，LIU Song-mei，PING Wen-xiang*
Abstract：
pathway ofSaccharomyces cerevisiae
gene was used to screen mutants withadh
L1 and L2 (the flanking fragments were complement withSaccharomyces cerevisiae
01 by LiAc method and the alcohol dehydrogenase I (ADH I) inSaccharomyces cerevisiae
is interfered.
Key words：Saccharomyces cerevisiae；gene deletion；alcohol dehydrogenase I (ADH I)
中图分类号：TS2625 文献标识码：A 文章编号：
啤酒是以麦芽为主要原料，添加酒花，经酵母发 方面的研究报道几乎未见到。从酵母代谢途径可知，控
酵酿制而成的，是一种含二氧化碳、起泡和低酒精度 制乙醇含量的两个酶是乙醇脱氢酶I(ADH I)与乙醇脱氢
[1]
的饮料酒 。其酒精的含量一般为3%～4%(V/V)。随着 酶II(ADH II)。ADH I的作用是将乙醛变成乙醇，ADH
[3]
人们生活水平的提高及口味的多样化，低醇乃至无醇啤 II的作用是将乙醇转变为乙醛 。
[4]
酒成为部分消费人群的首选。目前，世界上生产无醇 本实验利用抗性基因筛选基因敲除突变体的方法 ，
[2]
啤酒的方法主要有二大类 ：一是以限制发酵方法来降 通过PCR技术获得一段带有筛选标记和酵母同源区域的
低制酒发酵过程中生成乙醇的量；另一类是在后发酵过 目的基因，通过常规醋酸锂转化法，使筛选标记与酵
程中将产生的乙醇除去。 母adhI基因发生同源重组，得到一株ADH I酶活性降
随着基因工程技术的快速发展，以及对酿酒酵母基 低的工程菌株。
因的深入研究，从代谢途径出发，构建低乙醇产量的
酿酒酵母基因工程菌株，可在不改变原有啤酒工艺的基 1 材料与方法
础上，实现低醇乃至无醇啤酒的生产。但目前有关这
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