MALDI．TOF质谱技术研究多肽一级结构特性.pdfVIP

维普资讯 中 国 生 物 工 程 杂 志 第 23卷第 6期 CHINABIOTECHN0L0GY 2003年 6月 MALDI．TOF质谱技术研究多肽一级结构特性 * 黄河清 KimWonsunk MiaoHai (1厦 门大学生命科学学院生物学系 厦 门 361005 2DepartmentofChemistryandBeckmanInstituteUniversityofIllinois Urbana IL61801 USA) 摘要 海免酸性多肽 (Aplysiaacidicpeptide，AAP)和海兔胰 岛素 cp(AplysiaInsulinC日，AIC日)的一 级结构分别 由27和 15个氨基酸残基组成 ，其 中前者含有 6个亮氨酸残基 (L)，并组成 3对 L．L 键 ，后者仅有 2个亮氨酸残基 ，组成 1对 L．L键 。选用基质辅助激光解吸离子化飞行时间(matrix． assistedlaserdesorption／ionizationtimeoffight，MALDI．TOF)质谱技 术研 究 AAP，AIC9和它们 分解 产 物 的一级结构稳 定性过程 中，发现在弱酸性介质条件 下 ，AAP和 AIC 的 L．L酰氨键键 能 比 L．R 键能(R表示除了L以外的氨基酸残基)更强 ，不易被分解 。AIc。和猪血管紧张肽 I(angiotensinI， AnI)样品中均含有单 电荷 的多聚肽 。随着多肽聚合数递增 ，多肽质谱峰 的相对强度剧减 。AIc。 在形成 多聚肽过程 中，发生释放 H 的现 象。 关键词 MALDI．TO F 质谱 多肽 一级结构 海兔 胰 岛素 酸性多肽 了解神经 多肽 (neuropeptides)在脑神经系统 中 经多肽混合物组成和结构分析 的可行性 ，并将成为 的分布 、结构与功 能对正确理解脑学 习和记忆功 能 今后研究神经 多肽组成与脑 功 能 内在联系 的超微 起着重要的作用 。 目前 ，单凭基 因序列仍然无法准 量最佳分析技术 。 确地预测最终多肽产物 ¨ J。海兔 (Aplysia)中枢神 l 材料与方法 经系统是 目前神经信号传导和神经多肽结构研究 的经典 模 型 之 一 。该 系 统 主要 有 口腔 神 经 节 1．1 材 料 (buccalganglion)、大脑神经节 (cerebralganglion)、腹 AAP由美 国伊利诺依大学生物技术 中心合成。 部神经节 (abdominalgnaglion)、胸膜和腹部连接管 AIc。由美 国伊利诺依大学 Sweedler实验室提供和 (pleura1．abdominalconnective)等部分 组成 24l。如 AnI购 置 于 美 国 Simga 公 司 。基 质 2，5． 何准确定位分析神经节和神经管 内外表层 的超微 dihydroxybenzoicacid(DHB)购置 美 国 ICN生物 医学 量混合多肽组成和分布状况 ，一直是分子神经生物 公司 。 学研 究亟待解决 的关键性 问题之一 。 。 1．2 方 法 MALDI-TOF质谱技术是 目前研究神经 多肽分 1．2．1 样 品配制 粉 状的 AAP和 AIC。用 pH6．5 布和组成结构最有效 的分析技术之一 。但 如 左右双重蒸馏水配制 ，猪血管紧张肽用 甲醇配置 。