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玉米油中抗氧化剂的检测 北京莱伯泰科仪器有限公司 摘要：本文建立了GPC-HPLC 检测法同时测定玉米油样品中特丁基对苯二酚（TBHQ）、丁基羟基茴香醚 （BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）三种抗氧化剂的分析方法。GPC 可有效去除玉米油中油脂等大分子物 质，准确收集抗氧化剂，采用HPLC-UV 检测器，检测波长为280nm，准确检测玉米油中抗氧化剂含量。 凝胶净化方法简单，有效去除干扰物质，保护分析仪器；HPLC-UV 检测结果准确，具有良好的标准曲线线 性、重复性以及检测结果，该法可在18min内完成样品中3 种物质的全部检测。 前言： 食品抗氧化剂是能阻止或延缓食品氧化变质、提高食品稳定性和延长贮存期的食品添加剂。氧化不仅 会使食品中的油脂变质，而且还会使食品退色、变色和破坏维生素等，从而降低食品的感官质量和营养价 值，甚至产生有害物质，引起食物中毒。特丁基对苯二酚（TBHQ）、丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基 羟基甲苯（BHT）为人工合成油溶性抗氧化剂，常用于添加在动植物油等人类食品中，防止油脂变坏，在 食品中的使用量较少。本文采用LabTech AutoClean全自动凝胶渗析色谱净化系统对植物油进行净化，根 据分子排阻色谱原理可有效去除油脂等大分子干扰物质，准确收集抗氧化剂，采用HPLC法对其中含量进 行检测，方法简单、快捷，不仅去除干扰峰对目标物的影响，同时可大大保护分析仪器系统，延长色谱柱 使用寿命。 1 1 11、 实验部分： 1.1仪器与试剂 AutoClean全自动凝胶渗析色谱净化系统（莱伯泰科有限公司，美国波士顿） LC600二元高压梯度高效液相色谱系统（北京莱伯泰科仪器有限公司，北京） EV331旋转蒸发仪（北京莱伯泰科仪器有限公司，北京） 标样： 特丁基对苯二酚（99.5%，迪马公司） 丁基羟基茴香醚（98%，迪马公司） 二丁基羟基甲苯（99.0%，迪马公司） 甲醇（色谱纯，Fischer公司） 乙酸乙酯（分析纯，北京化工厂） 环己烷（分析纯，北京化工厂） 乙酸（分析纯，北京化工厂） 1.2标样和样品处理 1.2.1标准溶液配制 TBHQ、BHA、BHT 标准使用液（GPC）：准确称取TBHQ、BHA、BHT 标准品各100mg（精确至0.1mg）， 用乙酸乙酯：环己烷（1:1）定容至100mL，配置成1mg/mL的储备液，于4℃冰箱中避光保存。吸取10mL 标准储备液于100mL容量瓶中，乙酸乙酯：环己烷（1:1）定容，配置浓度为100μg/mL的标准使用液， 于加标样品GPC 净化回收率使用。现配现用。 TBHQ、BHA、BHT 标准溶液（HPLC）：取TBHQ、BHA、BHT 标准品各100mg用甲醇溶解并定容 至100mL作为混合标样储备液。用甲醇稀释1mg/mL的标准储备液至浓度依次为10μg/mL、50μg/mL、 100μg/mL、200μg/mL、250μg/mL的标准溶液，将其依次进样进行液相色谱检测，建立工作曲线。 1.2.2样品制备 混合均匀的玉米油，称取10g（精确至0.1mg），用乙酸乙酯：环己烷（1:1，体积比）准确定容至100.0mL 为样品溶液，涡旋混合2min。 样品原液：取5mL混合溶液，用乙酸乙酯：环己烷（1:1）定容至10mL容量瓶，3 个样品平行。 加标样品：取5mL混合溶液，加1mL 浓度为1mg/mL的标准使用液（GPC），用乙酸乙酯：环己烷 （1:1）定容至10mL容量瓶，3个样品平行。 1.2.3样品净化 将TBHQ、BHA、BHT 标准使用液（GPC）、样品原液、加标样品经凝胶渗透色谱Autoclean净化， 收集流出液，旋转蒸发浓缩至近干，用甲醇定容至2mL，进高效液相色谱分析。 GPC 的参数设置： 溶剂：乙酸乙酯：环己烷=1:1（体积比） 流量：5mL/min 检测波长：254nm 收集范围：7.5min-17min 上样量：2mL 1.3检测仪器的检测条件 1.3.1色谱条件 高效液相色谱： 色谱柱：Labtech C18（250 mm X4.6 mm，5μm） 流速：0.8mL/min 流动相：A：甲醇，B：1%乙酸水溶液 梯度程序 时间（min） 流动相A(%) 流动相B(%) 曲线方式