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广东省部分猪场副猪嗜血杆菌的分离与鉴定 姚晓辉1，陈芳艳s，陈瑞爱1，唐秀英1，区德庆·，吴诗敏2，王林川·，。 (1．广东大华农动物保健品股份有限公司，广东新兴 527400；2．华南农业大学兽医学院，广东 广华南农业大学动物科技学院，广东广州510642) 摘要：从广东部分猪场发病猪的肺脏，气管和扁桃体分离细菌并培养，获得3株可疑菌株。根据发病 猪的临床症状、剖检病理变化以及菌落的形态、菌体特征和生化试验结果，初步鉴定所分离的3株菌株为副 猪嗜血杆茵。在细菌学鉴定的基础上，同时结合特异性PCR检测方法进行鉴定，结果3株菌株均扩增出822 bp的特异性目的条带，进一步证实了所分离的3株菌株均为副猪嗜血杆菌。 关键词：副猪嗜血杆菌；分离；鉴定 中图分类号：$852．61乏 文献标识码：A 文章编号：1005—8567(2009)04—0020—02 副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌(Haemo—1．2试验方法 1．2．1 philusparasuiS，HPS)引起猪的一种以多发性浆细菌的分离 含小牛血清和NAD的TSA mL 膜炎、关节炎及高死亡率为特征，严重危害仔猪和 培养基的制备：称取4克TSA培养基加入i00 生长猪的传染性疾病。副猪嗜血杆菌作为猪呼吸 蒸馏水中，121℃高压灭菌20min，待温度降至 道综合症(Porcine DiseaseCom- Respiratory 55℃左右时(以手背不感到烫为适)，加入NAD (经0．22u prex，PRDC)主要的继发细菌性病原，近年来引起 m的细菌滤器过滤)，使NAD的终浓度 u 的发病率越来越高，特别是在猪繁殖与呼吸综合 为200 g／mE，然后加入小牛血清，使血清浓度达 征(PRRS)和猪圆环病毒2型(PCV-2)感染后，几 mL。 到5％，倒平板，每板大约10 乎总是伴随着HPS的感染[川。HPS主要感染断奶后 在无菌操作条件下，从疑似病猪的鼻腔、气 和保育舍的仔猪，通常见于5-8周龄的猪，发病率 管、肺脏、心脏、心包积液、关节液、脾脏等病料中 一般为10％～15％，严重时死亡率可达50％。HPS引取样，在TSA培养基上划线接种，37℃培养48h， 起的猪呼吸道疾病的临床症状与其他细菌感染很 挑取可疑单个菌落进行纯培养。纯培养后的细菌， 相似，易混淆，要确诊还必须进行细菌的分离和鉴 涂片后革兰氏染色镜检。再将细菌接种普通肉汤 定。在对广东猪场进行HPS进行调查的，分离到了 培养基和麦康凯培养基，37℃培养48h，将在TSA 3株疑似菌株，进行了常规的分离鉴定和PCR检培养基上能生长、但在普通琼脂培养基和麦康凯 测，现报道如下： 培养基上不能生长的可疑细菌(5、10、14号细 1材料与方法 菌)接种TSB营养肉汤。 1．1试验材料 1．2．2细菌学鉴定微量生化管鉴定：取上述接种 1．1．1 病料的来源广东省珠海、河源、云浮地 TSB营养肉汤的5、10、14号细菌分别接种于葡萄 区的养猪场送检仔猪和病料。 糖(两管)、麦芽糖、果糖、木糖、阿拉伯糖、蔗糖、乳 1．1．2副猪嗜血杆菌血清型4标准菌株华南糖、靛基质、甘露醇、山梨醇、