人脐带间充质干细胞在大鼠肝切模型中分化的实验研究.pdfVIP

中文摘要 目的： 本研究用携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，GFP)的 慢病毒载体(lentiviral vector,LV) 转染到人脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stemcells, HUC-MSC)注入大鼠部分肝叶切除肝细胞再生模型后，观察 人间充质干细胞在大鼠肝脏的分布及肝脏组织病理学改变，以及检测 CD90 等分子 标识在大鼠部分肝叶切除肝细胞再生模型中的变化，探讨人脐带间充质干细胞是否 具有定向分化为肝细胞的能力。 方法： 将人脐带间充质干细胞体外分离纯化培养，并且进行 CD44、CD29、CD105、 CD90、CD34、CD45、CD106、CD31、CD40 和 HLA-DR 等免疫学标志物的检测鉴 定， 以慢病毒载体介导的增强型绿色荧光蛋白（GFP）转染到人脐带间充质干细胞 中。将大鼠随机分成三组：空白组，模型组及实验组，三组均建立大鼠部分肝叶切 除肝细胞再生模型，模型组注入普通未标记的人脐带间充质干细胞，实验组注入有 GFP 标记的人脐带间充质干细胞，空白组注入等量生理盐水，正常饲养。三个月后 分离大鼠肝脏细胞，进行以下指标的检测，包括：组织冰冻切片 HE 染色观察三组 实验动物肝脏病理形态改变，荧光显微镜和激光共聚焦观察标记 GFP 的人脐带间充 质干细胞在肝组织的分布情况，流式细胞仪检测 GFP 及 CD90 等分子标记物在肝细 胞中的分布及表达量。 结果： 病理切片显示带有 GFP 的人脐带间充质干细胞在组织上表达，其中一部分聚集 于血管内，形成栓子，附在血管壁上；手术后各组的大鼠肝脏均有炎症反应，但组 织在常规显微镜下观察肝脏结构未发生明显改变，各组间也未见明显的形态学差 异。流式细胞仪检测人间充质干细胞可高表达 CD44、CD29、CD105 和 CD90，不 表达 CD34、CD45、CD106、CD31、CD40 和 HLA-DR。流式结果显示，模型组 GFP 的表达率为 0.27%±0.21%，实验组为 11.68%±1.46%，与模型组相比具有统 计学意义（在α=0.05水平上，P=0.0000.01）。CD90 的表达结果显示，模型组 CD90 I 0.843% 0.146% CD90 0.026% 0.017 的表达量较高，为 ± ，实验组低表达 ，阳性率为 ± ， 与模型组相比具有统计学意义（在α=0.05水平上，P=0.0020.01）。。 结论： 1. 使用组织块法分离原代细胞后，培养从脐带中获得大量的脐带间充质干细 胞，并且经流式细胞仪检测高表达 CD44、CD29、CD105 和 CD90。 2.GFP 标记作为一种生物学实验技术，能够准确的进行细胞标记，并且性质 稳定，时间长达 3个月，是一种较好而且可靠活细示踪剂。 3. 人脐带间充质干细胞在大鼠肝脏内，可能分化为肝细胞并且易被检测到， 但是在门静脉管壁上易于形成细胞栓子。 4. 脐带间充质干细胞在注入大鼠肝细胞表达 CD90，提示可能已经有向肝干 细胞的分化。 关键词： 间充质干细胞，慢病毒载体，肝细胞，干细胞，流式细胞术 II Abstract Abstract AAbbssttrraacctt Objective: Objective: OObbjjeeccttiivvee:: This study is to detect the distribution of human umbilical cord mesenchymal stem cells (HUC-MSC) which transfected by Lenticiral vector(LV) with enh