自口腔粘膜上皮脱落细胞中快速提取人基因组DNA的方法比较.pdfVIP

维普资讯 曼旦检验医学与临床2002年6月笨3卷第2期 · 论 著 · 自口腔粘膜上皮脱落细胞 中快速提取人基因组 DNA 的方法 比较 李 华 梁东春 郭 刚 张镜宇 (天津医科大学 内分泌所 300070) 摘 要 ：目的 建立简单、快速 的人基 因组 DNA 的提取方法。方法 用四种不 同取材方法采集人 口腔粘膜上皮脱落细胞 ， 利用三种不同提取步骤提取人基 因组 DNA，并将各种方法所提 的DNA进行 比较 。结果 通过对所提 DNA进行 OD值测定并计 算 DNA 的质和量后发现 ，用牙签刮取人 口腔粘膜上皮细胞、利用细胞裂解法提取 的DNA其纯度和产量最高，以各种方法所提 的 DNA 为模板作 PCR后均 出现 了预定务带 。结论 用本文建立 的人基 因组 DNA样 品的制备方法取材方便 、提取简单 、对 身体无 刨伤且适 合不 同需要，值得 推广 应用。 关键词 ：口腔 粘膜上皮细胞 ；DNA rIhemethodsofhuman genom icDNA extraction from oralm ucosalepithelialcells LlH ua LlANGDongchun，GUoGang etaf．ResearchInstitute0fEndotrinologY，丁ian inMedicafU，Hversitv，TJan in300070 Abstract：Objective ToestablishasimpleandrapidmethodofDNA extraction．Methods ThemethodsofextractingDNA from humanoralmucosalepithelialcellswereconstructed．M eanwhile，theauthorscomparedthefourmethodsofcellsamplingand threeprocessesofDNA extraction．Results ThebestwayofDNA extractionwascollectingspecimenbyscrapingoralmucosalepi～ thelialcellsbytoothpick，afterthatadopting thecelllysismethodtOobtain DNA．Conclusion Themethodsofhuman genom ic D A extractionfrom oralmucosalepithelialcellswereeasy．simpleandrapid． Keywords：Oralm ucosalepithelialcell；DNA 根据现代分子生物学 的研 究对疾病病 因的认识 。 不同的提取方法 (煮沸法、细胞裂解法、TKM 法)从 中 科学家们 已经有 了比已往更加深入 的理解 ，认为所有 提取 DNA，然后对所提 DNA 进行 紫外分光分析，同 疾病无不与遗传背景有关，即不外是基 因异常或基 因 时用 PCR方法测试 了各 种方法提取 的 DNA 用 于基 表达的失常。人体基 因组 DNA 不但是新 一代诊断 因片段扩增的模板活性。 基因诊断的标本或样 品，也是对疾 病防治进 行分子水 1．2．1 煮沸法_l1] 分别将 四种取材方法得到 的人 口 平研究的直接 “对象”材 料 。本 实验 室 已经做 过有 关 腔粘膜脱落细胞悬浮于500~1生理盐水 中，室温下 2 血样、小块组织等基 因组 DNA 提取 方法山 的研 究。 000×g离心 10min，弃上清 ，再加 入 500~1生理盐水 ． 如果在抽血 、穿刺、活检 或手术 等情 况下取 样存在 困 2000×g离心 10min，弃上 清，再 用生理盐水 清洗 多 难 时，必须改用无创的、简便 的、为受试 者容易接受的 次，然后加入双蒸水 ，在沸水 中煮 5min，取 出后 2000 其 它取材方 法，以及 与之相 适 应 的 DNA 提 取 步骤 。 ×g离心 10min，取上清