AZC-5(Aziridinoquinonylcarbon-5)對DNA烷基化作用能力的研究及.pdfVIP

AZC-5(Aziridinoquinonylcarbon-5)對DNA 烷基化作用能力的研究及 其對Hep-2 喉癌細胞毒殺作用的探討 Studies on the DNA alkylation ability of AZC-5 and possible mechanism of death effect on Hep-2 cell induced by AZC-5 中文摘要 AZC-5 ( bis-Aziridinoquinoylcarbon-5 的簡稱)為bis-Aziridinoquinonyl 類的抗癌藥物。而上述藥物是由Aziridinylbenzoquino 類的化合物衍生而來。 在過去已經有實驗證實此類化合物可以藉由烷基化 DNA ，使DNA 與化合物結 合，而影響DNA 雙股螺旋打開，進而影響癌細胞的增殖。本論文所用藥物AZC-5 即是有此特性的新合成雙體結構的化合物。由 in vitro 的實驗結果證明AZC-5 在2mM~200mM 濃度下的確可烷基化DNA ，使DNA 雙股不易分開為單股。 而在細胞毒性及存活率的實驗中 , 利用MTT assay 的方法測試細胞的相對存 活率及Trypan blue 染色計算細胞死亡率。結果發現人類喉癌細胞Hep-2 隨著 劑量及時間的增加會增加其死亡率 , 並且與正常細胞Skin Fibroblast 有明顯 差異。Hep-2 細胞經AZC-5 作用24 hrs.後其IC50=5.5mM 。 而在AZC-5 造成Hep-2 細胞死亡的機制探討上，我們發現在AZC-5 作用24 hrs.後低於0.75mM 時會arrest 在G2/M phase 而大於0.75mM 至3mM 時 則使細胞arrest 在G2/M phase ，而當藥物作用到60 hrs.時除了有G2/M arrest 外並且可以在floe cytometry 儀器的觀察下看到sub-G1 峰的出現， 但對於調控細胞週期的重要蛋白 cdc-2 與 cdk-2 在總量表現上並沒有明顯變 化。 由Hoechst stain 結果中發現AZC-5 作用60 hrs.後在 1.5mM 有明顯的 apoptotic body , 而1H NMR上所得到的結果也顯示細胞膜磷酯質CH2/CH3 的比值隨AZC-5 作用時間的增加也顯著的上升。由western blot 的結果中看 到AZC-5 處理Hep-2 cell 24hrs.後, p53 蛋白有略微活化增加的現象 , RNA 結合物質TIAR 蛋白表現量也大幅增加至3 倍，抑制apoptosis 產生的Bcl-2 蛋白表現量也很高 , 在60 hrs.時Bcl-2 表現量才下降。 英文摘要 AZC-5 (bis-Aziridinoquinoylcarbon-5) is a kind of anti-cancer drug like bis-aziridinoquinonyl thiaters. It’s a new compound that developed from aziridinylbenzoquinone drug. In the previous experiments, the ability of DNA alkylation by aziridinylbenzoquinone compounds had been confirmed. It’s used to disturb DNA replication and decrease the survival rate of cancer cell. We synthesis a new bis-type anti-cancer drug AZC-5 by the different chain length and composed of linker. From the results, we confirmed the ability of DNA alkylation and the cross-link with DNA by AZC-5. In the preliminary data, it’s found that the AZC-5 induces cell death of human larynx cancer cell (Hep-2) in a dose-dependent and time-dependent manner. The IC50 of AZC-5 to Hep-2 cell is 5.5 m