体外试验与生物新技术在毒理学中的应用.ppt

第 十 二 章 体 外 试 验 与 生 物 新 技 术在 毒 理 学 中 的 应 用 食品毒理学 1内容提要 第一节体外试验 第二节 哺乳动物细胞制备和培养 第三节 分子生物学技术在毒理学中的应用 2第一节体外试验 体外试验的发展趋势①全世界每年约有千种以上的新化合物作为商 品进入人类的环境。而且在现有的化合物中, 还有相当数量没有进行必要的毒理学评价。在 此种情况下,利用经典的整体动物试验取得完 整的毒理学资料极为困难。解决此种问题的重 要方向是体外试验。②现有的整体动物毒性试验方法需消耗大量的 时间和昂贵的经费,而体外试验则可节省时间 和经费。 3? ③动物保护主义运动的兴起,要求尽量减少动 物的使用,而且应当尽量减少痛苦地处理动物。④更重要的是由于生物技术的巨大进步,不仅 表现在细胞组织及器官培养领域,而且在生物 分子技术方面,也为毒性试验和研究提供了新 的方法和工具。所以体外试验在毒理学研究中所占的地位日趋 重要,甚至有占主导地位的趋势。 4? 体外试验的发展,并不排斥体内试验 本身的重要性,两者必须相互补充、 相互验证才能为毒理学研究提供坚实 的科学基础。 5一 分类 可依据体外试验在决策过程中所起的作用 将其分为3类:①筛选试验。它仅提供决策过 程的最初的资料,还需要进行更权威的试验, 无论是整体还是体外试验。②附加试验。它可 为协作部门或法律部门的最终决策过程提供有 用的资料,如机理的研究,但仅有它是不够充 分的。③替代试验。它是在大量实验的基础上, 使体外毒性试验能替代整体动物试验,以提供 更多的信息。 6二 基本原理体外试验的基本原理是所观察到的毒理学效 应均是毒物和/或反应活性代谢产物在敏感性细 胞上或敏感细胞内某一分子靶部位作用的结果。 如将敏感细胞或某分子靶部位例如酶,在体 外条件下,维持其正常的生理功能,并观察外源 化学物对其的影响,即将毒理学中毒物中毒的启 动阶段,在体外条件下,观察其对外源化合物的 反应和外源化学物对它的作用。 基于上述原理,体外试验模型取材范围很宽, 可取哺乳动物的离体脏器灌流、脏器切片温育、 细胞培养、亚细胞器组份以及提纯的某些酶分子 或DNA分子等等。 7三 体外试验的优缺点 1、 体外试验的优点能控制环境因素;可排除相互作用的系统如免疫系统、神经内 分泌系统的影响;每一剂量水平可利用大量的生物样品,如细 胞,细胞器等;试验间的误差较少;可同时和/或反复多次取样; 8三 体外试验的优缺点 1、 体外试验的优点可做成复杂的互相作用的试验系统,如复合 细胞培养等;较为快速和经济;需要较小量的受试化合物;产生较小量的有毒废物;可以利用人体细胞;减少整体动物的使用。 91、 体外试验的优点其中特别值得一提的优点是体外试验的简便和 易于利用人体细胞。体外毒性试验结果可迅速得出,将减少了解新 化学物毒理学资料所需的时间,最终可以缩短 从新化学物的合成到产品进入市场的时间过程。 此外,对鉴定毒理学资料有问题的新化学物, 可及时终止开发,减少由资源到产品的投入。在毒理学整体试验中禁止直接进行人体试验。 在体外试验中,利用人体细胞组织进行试验, 可较好地解决物种差异的问题。 1 02、 体外试验的缺点①体外到体内外推的问题。 体外试验是依据毒性作用的始发阶段及继 续发生的分子与细胞反应,其与整体系统有差 异,如何将产生体外毒性的体外浓度与相应体 内剂量联系的问题是最终未解决的难题。 它需要更好的工具??预测性毒物代谢动 力学来解决,其关键在于发展有生理学基础的 毒物代谢动力学模型。 1 12、 体外试验的缺点 ②体外毒性试验难以预测慢性毒性。 因为,慢性毒性病理过程的机理所知甚 少,缺乏发展体外试验的理论依据,再者, 某些体外系统仍难以达到长期维持生理状态 的要求。 1 2二、体外试验系统 一 脏器灌流 1. 肝脏灌流是毒理学中研究外源化合物对肝脏损伤及代谢 的常见方法。在灌流液中加入外源化学物,此外要 维持灌流液的pH值、氧含量,还要控制适宜的灌流 液流速。 一般是以下腔静脉和门静脉为插管灌流通路, 为此应结扎肝动脉、上腔静脉,在恒温条件下灌流。 需指出肝灌流时间不能过久,以4h之内为宜,否则 肝细胞的功能与生存不能维持。 1 3二、体外试验系统 一 脏器灌流 2. 肠灌流利用某一部分小肠体外灌流可以研究一 些化合物的吸收及动力学过程。 如用大鼠,则在麻醉下切腹分离一段小 肠,在保持原有血液循环体系下,将肠两端 插管,清洗净肠中内容物,在恒温环境中灌 入灌流液。 1 4二、体外试验系统 一 脏器灌流 3. 膈肌-膈神经标本取完整的大鼠膈肌-膈神经置于恒温灌流 液中,在几小时之内可维持基本正常的神经肌 肉传导。 这种标本可用在研究神经毒物对神经传导 功能的损伤及强度。 1 5