药理实验中Caco一2细胞模型建立的评价指标.pdfVIP

维普资讯 药理实验中Caco一2细胞模型建立的评价指标 马 燕 ，李沛波 ，苏薇薇 ，陈大为 (1．中山大学生命科学学院，广东广州510275；2．沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳110016) 摘要 目的：建立Caco一2细胞模型并对该模型进行评价。方法：通过显微镜观察细胞形态学特点，测定跨上皮 细胞膜电阻，碱性磷酸酶活性和标志物普萘洛尔的转运特性等指标对 Caco．2细胞模型进行评价。结果 ：各项指标 的测定值与文献相符。本实验建立的Caco一2细胞模型的完整性、紧密性、通透性以及碱性磷酸酶活性较好。结论： 建立的Caco一2细胞模型符合各项指标的要求，可用于研究口服药物转运的吸收机制。 关键词 Caco一2细胞模型；TEER；碱性磷酸酶；药物转运 中图分类号：R285．5 文献标识码 ：A 文章编号：10131-4454(2006)09-0946-03 Caco-2细胞系(thehumancolonadenocarcinoma 检i贝0波长：288nm；流速 1mlfmin；进样量：20 l。 celllines)来源于人类结肠和直肠癌细胞，其结构和 2 方法与结果 生化特点类似于人类小肠上皮细胞。细胞在生长至 2．1 Caco-2细胞模型的建立 Caco-2细胞培养于 融合后有柱状突起，类似小肠微绒毛，并且含有小肠 MEM培养液中，接种于T-25组织培养瓶中，细胞在 刷状缘上皮相关的酶 ¨；一些存在于小肠上皮细胞 37℃，含5％CO：的培养箱中培养，培养液2～3天更 的主动转运系统，如糖类，氨基酸，二肽，胆酸基维生 换一次。实验时细胞接种于 12孔Transwell板的滤 素 B。：内源性因子的主动转运载体在Caco-2细胞模 膜上，细胞接种密度为 1×10／cm (2×10／m1)]。 型中也有表达。目前 Caco-2细胞模型已经广泛应 在Transwell滤膜的顶侧(apicalside，AP)和基底侧 (basolateralside，BL)分别加人MEM培养液0．5ml 用于新药的筛选与开发、药物肠吸收机制以及体外 和 1．5ml。接种 48h后更换培养液 ，隔天换液，培 代谢模型的研究。国内关于 Caco。2细胞模型的实 养 2l天待用。 验主要通过测定TEER值对模型进行评价，本实验 2．2 Caco。2细胞模型的评价指标 旨在通过多个指标对所建立 Caco。2细胞模型进行 2．2．1 细胞形态学观察：将细胞按照上述方法培 评价，提高模型的可靠性。 养于T一25培养瓶中，隔天换液，培养 14天，当细胞 1 仪器与材料 数量足够多时用显微镜观察并拍照。 1．1 仪器 Millicell—ERS电阻仪 (Millipore，美 2．2．2 TEER值的测定：在进行药物的转运试验 国)；MOTICAE21倒置显微镜(麦克思维)；3110型 之前，用细胞电阻仪测定跨上皮细胞电阻(transepi— CO 培养箱 (Forma，美国)；VS一1300L—U洁净工作台 theliumelectricalresistance，TEER)，确定细胞单层 (苏州安泰空气技术有限公司)；DINOXP680高效 的完整性和紧密性。 液相色谱仪，UVD170U紫外监测器，ASI