MiniVIDAS、PCR技术检测动物源性食品中沙门氏菌的应用.pdfVIP

第六次全国会员代表大舍暨第11次学术研讨会 ． 链球菌。这对于链球菌性乳房炎的早期预防及监测具有重要意义，避免了传统方法和直接PCR扩增造成的 假阴性的问题，可监控传染性病原菌的早期感染情况。特别是像无乳链球菌这样的传染性病原菌，一旦有一 头奶牛感染上后，迅速传染给整个牛群，如果不能准确、快速、及早的发现，往往造成严重的经济损失。 原奶样含有ICFU／mL的病原菌用常规培养法是很难检测到的。另外，链球菌属的多数病原菌对培养的条 件要求比较苛刻，增加了造成假阴性的几率二本方法克服了这些不足。 参考文献略 刘佩红 王建 张苏华 卢军 沈萍莉 徐锋 (上海市畜牧兽医站，上海201103) 98．8％，PCR法的敏感性和特异性均为100％。同时上述动物源性食品中均检出沙门氏菌，说明存在被沙 门氏菌污染的可能，应引起足够重视。 关键词：沙门氏菌；PCR；mini．VIDAS；动物源性食品 沙门氏菌是一群寄生于人和动物肠道内的无芽孢革兰氏阴性直杆菌，其茁型繁多，分布广泛，是一种 重要的人畜共患病原菌IlJ，它不仅能导致鸡白痢、鸡伤寒、副伤寒，仔猪副伤寒、流产等多种动物疾病， 而且在世界各地的食物中毒中，沙门氏菌引起的中毒病例占首位或第二位。给国家经济造成巨大损失，同 时严重威胁着人民的身体健康和畜牧业的健康发展。囚而人和动物沙门氏茁的检测一直是一个世界性的问 题【2J口 目前，包括我国在内的许多国家对沙门氏菌的检验普遍采用传统培养方法，报告检验结果大致需4—5d。 对该菌的快速检测研究目前也主要集中在免疫酶试验、免疫扩散法、乳胶凝集试验、免疫荧光法和酶联免 比，同时对部分动物源性食品中沙门氏菌的分布进行了检测分析。 1材料和方法 1．1材料 1．1．1菌种肠炎沙门氏菌(Salmonellaenteritidis) 由扬州大学畜禽传染病学农业部重点开放实验室 惠赠。大肠杆菌(Escherichia coli)，购自上海市疾病预防控制中心，由上海市畜牧兽医站保存。 美生物工程公司，常规试剂为国产分析纯试剂。 酸盐胱氦酸培养基(sc)均按国标方法配制或购白杭州天和公司； M一肉汤参照Sperber方法配制131。 1．1．4 mini．VIDAS由法国生物梅里埃公司提供，并配套供应专用试剂及工具． 1099 ． 其他论文 肉248份和虾仁58份；从某地区28个奶牛场中采集原料奶580份。 1．2方法· 1．2．1 PCR法 1．2．1．1 化乙锭、溴酚兰点样缓冲液、Taq酶、阳性对照、阴性对照、液体石蜡。 1…21 2试剂盒操作步骤 ． 蒸馏水洗涤两次，最后用1111l蒸馏水悬浮，隔水煮沸l 板溶液。 PCR循环参数：94(2预变性5mira PCR 1．2．2 VASSILIADlS(简称RV)中42C培养6-8 SLM中进行检测pI。 取lml混入lOml管中．于100C加热15min，从加热完毕的2ml中取500¨1加／X,VIDAS 1．2．3敏感性试验采用平板计数法，确定沙门氏菌细菌数量为106CFU／mL，然后将沙门氏菌和大肠杆 进行检测。 阳性菌株进行血清学试验和生化试验【sJ，井将3种方法的结果进行比较。 1．2．5数据分析与国标法相比检出试验的敏感性、特异性和符合率分别按下列公式进行计算。 敏感性=真阳性数／(真阳性数+假阴性数) 特异性=真阴性数／(真阴性数+假阳性数) 符合率=(真阳性数+真阴性数)，被检总数 2结果 2．1P(m和mjni-ⅧAS检测结果 肠杆菌组成比例为1：1000时。用mini-VIDAS检测为阴性，而PCR法则能检出。