应用蛋白质组学和RNAi 技术筛选鼻咽癌细胞中p53 功能相关蛋白质水.pdfVIP

维普资讯 PIlaf! … Www．pibb．ac．ca 应用蛋白质组学和 RNAi技术筛选 鼻咽癌细胞 中p53功能相关蛋白质 水 孙 懿 ，’ 易 红 ’杨轶轩 ’ 张鹏飞 ’ 李茂玉 D 李建玲 D 杨 芳 ，’ 肖志强D” 陈主初 l，卜 ()中南大学湘雅医院卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室，长沙 410008) 2)中南大学湘雅医学院肿瘤研究所，长沙 410078) 摘要 为了阐明鼻咽癌中高表达的p53蛋 白聚集与失活的机制，高通量地检测与p53功能相关的蛋 白质，首先采用RNA干 扰(RNAi)技术稳定沉默鼻咽癌细胞系CNE2的p53基因表达，然后用蛋 白质组技术研究稳定沉默该基因对鼻咽癌蛋 白质表达 谱的影响．通过对稳定干扰p53基因后鼻咽癌细胞系CNE2的蛋白质表达谱改变的研究，用基质辅助激光解吸电离飞行时间 质谱(MALDI．TOF．MS)分析和电喷雾串联质谱(ESI．Q．TOF．MS)验证鉴定了22个差异表达蛋白质．在这些差异表达蛋 白质中， 有些是已经报道的p53功能相关蛋 白质，如热休克蛋 白27(HSP27)、异质性胞核核糖核蛋 白K(1mRNPK)、14—3—3o等，其他 可能是新 的p53功 能相关 蛋 白质 ，如 elF4B、T l、hnRNPH3、SFRSI等 ．部分差异表达蛋 白质如 HSP27、14．3．3 和 GRP75经蛋 白质印迹分析技术进行了验证，同时pcDNA3．I-FLAG．p53质粒转染CNE2细胞引起了HSP27、14．3．3 表达下 调，GRP75表达上调．在鼻咽癌细胞中鉴定的22个差异表达蛋 白质大致可以分为 5类，包括信号传导相关蛋 白质、分子伴 侣、与转录和翻译相关蛋 白质、代谢相关蛋 白和细胞结构相关蛋白质，涉及到细胞周期的调控、分子基因表达调控、细胞黏 附、细胞代谢等众多事件，它们可能作为p53功能相关蛋 白质，为阐明鼻咽癌中p53蛋 白聚集及失活的机制提供了重要依据 和线索． 关键词 p53，鼻咽癌，蛋 白质组学，RNA干扰，双向电泳，MALDI-TOF．MS，ESI．Q．TOF 学科分类号 R739．62 鼻咽癌 (nasopharygealcarcinoma，NPC)是常见 诱导凋亡的生物学作用．由于鼻咽癌 中p53突变率 的恶性肿瘤之一，好发于东南亚地区及我 国南方各 小，因此极有可能是细胞蛋 白或病毒蛋 白与其结合 省市．病因学研究表明，鼻咽癌的发生与 EB病毒 后使其在鼻咽癌 中聚集与失活．有研究发现，高表 感染、遗传易感性、饮食习惯及某些环境理化因素 达 的细胞瘤基因蛋 白MDM2与p53结合抑制 p53 有关 ，是多基 因、多途径、多阶段改变 的病理过 蛋 白的转录活性 ，加速 p53蛋白泛素化和 降解，导 程 ，为多基因多阶段侵袭性疾病 ”【． 致p53功能失活6【】．胡巍等7[1采用p53免疫共沉淀结 p53基因是极为重要的抑瘤基因，具有阻滞细 胞周期、启动细胞凋亡、维持基因组稳定性的作 ·国家 重 点 基 础 研 究 发 展 规 划 项 目(973) (2002CB513100． 用[21．50％以上人类肿瘤的发生存在 p53基因高频率 2001CB510207)，教育部跨世纪优秀人才基金项 目(教育部科技函 突变失活，但在鼻咽癌 中p53基因突变频率低于 2【002]48号)，国家 自然科 学 基 金项 目30240056， 1O％．大量的研究显示：60％以上的鼻咽癌组织和 ，湖 南 省科 技 厅重 大 和 重 点科 研 项 目(04XK1001．