犊牛前脂肪细胞的原代培育.pdfVIP

细胞生物学杂志 Chinese Journal of Cell Biology 2005, 27: 89-92 犊牛前脂肪细胞的原代培养 1 1 2 * 夏　成　王　哲 　牛淑玲　张　才　张洪友 （黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆163319； 1 2 解放军军需大学军事兽医系临床教研室，长春130062；沈阳农业大学畜牧兽医学院，沈阳 110161） 摘要　　为了建立犊牛前脂肪细胞原代培养模式，以便深入地研究奶牛脂肪组织增生的生物 学特征。选用犊牛小肠网膜，采用原代消化细胞培养法培养出梭形细胞；同时以皮肤组织的成纤 维细胞培养作为对照。结果显示：培养出的梭形细胞成分均一，增殖旺盛，分化率高。经形态学 动态变化的观察，生长曲线及油红Ｏ脂肪染色抽取法测定，证明是功能活跃的前脂肪细胞，并在 体外重现了其增殖的全过程。因此，在犊牛小肠网膜中存在着可分化成熟的、生成脂肪的前脂肪 细胞。为进一步研究与肥胖、胰岛素抵抗相关的疾病如奶牛酮病、脂肪肝等打下了基础。 关键词　　犊牛前脂肪细胞；原代细胞培养；小肠网膜 脂肪细胞是胰岛素作用的经典靶细胞之一，与 泛酸钙，17mol/L牛转铁蛋白，100 mg/L青霉 人、动物的肥胖及胰岛素抵抗相关疾患如多囊卵巢 素，100 mg/L链霉素，10 mg/L胰岛素，蒸馏水 综合症、脂肪肝等的研究关系密切，近年来受到内 定容至1000 mL。消化液(1 mg/mL):称取100 mg 分泌领域的重视。前脂肪细胞是一类具有增殖和向 Ⅰ型胶原酶，D-Hanks溶液定容至100 mL。上述 脂肪细胞分化能力的特异化的前体细胞，它的存在 溶液均经调整pH值至7.4~7.6，0.22m微孔滤膜 和作用持续于人、动物的一生。目前，有关鼠、 正压过滤除菌，分装置-20℃保存。油红Ｏ工作液 [1～3] [4] 人和猪的前脂肪细胞的原代培养已有报道 ，但 :称取4.2 g油红Ｏ溶于1200 mL异丙醇中室温静 是牛的尚未见报道。因此，本研究对黑白花犊牛前 置过夜，分析滤纸过滤后收集滤液，并加入900 mL 脂肪细胞进行原代培养，从而为应用体外脂肪细胞 三蒸馏水，于4℃再次静置过夜后过滤两次即可于 培养技术探索奶牛脂肪代谢疾病如酮病、脂肪肝的 室温贮存备用。 发病机制打下了基础。 1.1.4仪器 培养箱购自日本CO Sanyo电子仪 2 器有限公司，倒置显微镜购自上海光学仪器有限公 1 材料与方法 司，数码相机为Nikon E5700。 1.1材料 1.2方法 1.1.1组织来源 选取临床检查无异常的新生1 1.2.1犊牛前脂肪细胞、皮肤成纤维细胞的原代培 [1~3] 日龄公犊牛1头。颈动脉放血致死，无菌开腹切取 养 采用人、鼠和猪的前脂肪细胞培养方式 。 腹腔内小肠网膜、腹部皮肤组织。 手术无菌切取腹腔内小肠网膜组织约60 g，同时切 取皮肤组织约0.5 cm×3 cm进行成纤维细胞培养 1.1.2主要试验用品和化学试剂 培DMEM/F12 养基(1∶1)，小牛血清， Ⅰ型胶原酶，HEPES， 作为对照。D-Hanks液洗涤，分离去除脂肪组织