新型荧光试剂用于儿茶酚胺类神经递质的高效液相色谱检测.pdfVIP

2012年 5月 中央民族大学学报 (自然科学版) May，2012 第2l卷 第2期 JournalofMUC(NaturalSciencesEdition) Vo1．21 No．2 新型荧光试剂用于儿茶酚胺类神经递质的 高效液相色谱检测 李金淑 ，张华山 ，王 红 (1．中央民族大学 生命与环境科学学院，北京 100081；2．武汉大学 化学与分子科学学院，湖北 武汉 430072) 摘 要 ： 利用新型荧光试剂 1，3，5，7一四甲基_8一苯基一(4-O一(N一琥珀酰亚胺 乙酸酯))一二氟化硼一二吡咯 甲烷 (TMPAB．OSu)为柱前衍生化试剂 ，在氰基色谱柱上通过梯度洗脱对三种儿茶酚胺神经递质进行 了分离和检 测．以乙腈一水为溶剂 ，pH7．5的硼酸一硼砂缓冲溶液 中在30~C条件下衍生反应 5min后获得稳定 的荧光衍生产 物．激发波长和发射波长分别为497nm和 509nm，实现 了儿茶酚胺柱前衍生检测 ，方法 的重现性好、灵敏度 高．儿茶酚胺 的线性相关系数大于0．9970，检出限为5nmol／I． 关键词 ： 高效液相色谱 ；柱前衍生 ；荧光检测 ；儿茶酚胺 中图分类号 ：0652．63 文献标识码 ：A 文章编号 ：1005—8036(2012)02-0019-04 神经递质在生物体中枢神经系统中参与突触上的神经信号传递作用…，其 中儿茶酚胺类含有邻苯 二酚基本结构和氨基 的神经递质，包括多巴胺 、去甲肾上腺素和肾上腺素它们参与神经功能的调控并与 一 些功能性疾病及器质性病变的出现有关．因此建立一种选择性好 、灵敏度高的检测分析方法对于疾病 的诊断和治疗具有重要的作用．对于儿茶酚胺类物质的传统荧光分析方法主要是三羟基吲哚法 和乙 二胺缩合法 J，但由于其衍生产物不稳定和选择性不高 ，限制了其应用．随后出现的测定方法有放射酶 化学法E43、电化学分析法 、化学发光法 和液相色谱-质谱联用法 、毛细管 电泳法 ．近年来 ，高效 液相色谱法因其具有高分离能力 ，与高灵敏的荧光检测相结合，在儿茶酚胺类物质的分析中得到了广泛 的应用 ．本文报道采用新型荧光试剂 1，3，5，7一四甲基-8一苯基一(4一O一(N一琥珀酰亚胺 乙酸酯))一二氟 化硼．二吡咯甲烷(TMPAB．OSu)，建立 了高效液相色谱分离一荧光检测儿茶酚胺 的分析方法．该法的线性 范围为0．03～5gmol／L，相关系数0．9970～0．9995，相对标准偏差为 0．6～4．6(n=6)． 1 仪器与材料 1．1 仪器与试剂 高效液相色谱仪 (Agilentl100，美 国)，配置有 以下组件 ：高压四元泵 、在线真空脱气机 、定量进样六 通阀(20 L)、荧光检测器 ，由化学工作站软件控制各组件的运行 ；氰基柱 (250×4．6mm，5 m，美 国)；MettlerToledoDELTA320pH计． 多巴胺 、去甲肾上腺素和肾上腺素 (Sigma，美 国)；硼酸 、硼砂 、醋酸 、磷酸 、醋酸钠 、高氯酸 、氢氧化 钠、乙腈、甲醇、四氢呋喃、五氧化二磷 (分析纯，上海试剂公司)；TMPAB—OSu (本实验室合成，2× 10 mol／L无水乙腈溶液)；实验用水为二次蒸馏水． 1．2 色谱条件 流动相由甲醇和水溶液配制 ，进样前 ，氰基柱用流动相平衡 30min，样品进样量为20 L，流速为 1．0 收稿 日期 ：2011-06—19 基金项 目：国家 自然科学基金 (No；国家 民委科研项 目(No．09ZYO11)；中央民族大学青年教师科研基金 (No．MZ2008033)． 作者简介 ：李金淑(1978一)，女(汉族)，湖南衡阳人 ，中央民族大学生命与环境科学学院副教授 ，主要研究方 向：分子探针 与检测试剂． 万方数据 中央民族大学学报 (自然科学版 ) 第 21卷 mL／min，柱温为室温 ，荧光激发及发射波长为 ：A ／A =497／509nm． 色谱分离儿茶酚胺衍