PHA767491抑制肝癌细胞生长的研究.pdfVIP

浙江理工大学学报，第30卷，第3期，2013年5月 of Sci—Tech Journal Zhejiang University 2013 V01．30，No．3，May 文章编号：1673—3851(2013)03—0364—03 PHA．76749 1抑制肝癌细胞生长的研究 李伟1，尚世强1，楼金吐1，陈黎勤1，李仲杰3。魏旭斌2 (1．浙江大学医学院附属几童医院中心实验室，杭州310003；2．浙江理工大学生命科学院，杭州310018； 3．浙江大学医学院，杭州310052) 用。M丌实验结果表明，PHA-767491能显著抑制多种肝癌细胞株的增殖。Hoechst33342染色结果也表明PHA- 767491可以诱导肝癌细胞进入凋亡。表明PHA-767491对肝癌细胞具有较高的杀伤作用，可能具有广阔的应用前景。 关键词：PHA-767491；肝癌细胞；凋亡 中图分类号：Q279 文献标志码：A 0 引 言 自无锡展望化工试剂有限公司，Hochest33342购 PHA一767491(2-pyridin一4一yl一1，5，6，7一tetrahy— dropyrrolo[3，2-c]pyridin-4一one)是最新发现的一种 抗癌小分子化合物，因其和ATP结构具有极相似 空间构型，能竞争性地与某些激酶结合从而发挥抑 生命科学院细胞生物研究所。 制激酶磷酸化功能[1。3]，研究表明PHA-767491对细 1．2细胞增殖检测 胞周期中关键因子Cdc7激酶具有极强的竞争性抑 将肝癌细胞用含10％小牛血清的DMEM按 制作用，而抑制DNA复制的起始[2]。同时PHA- 105／mL稀释后，以每孑L100肚L的量接种到96孔板 767491对细胞周期蛋白Cdk9也表现出了较强的抑 中，PHA-767491按0．5、1、2．5、5、10 ptmol／L的5 制作用，Cdk9被抑制后促使抗凋亡蛋白Mcll和 个浓度，每个浓度设6个复孔，另设细胞对照，空白 Xiap表达量明显下降，多种凋亡蛋白如T-H2AX、 对照，也设6个复孔。12h后，弃去培养液，用2％的 ADP-ribose caspase-3剪切体、PARP(polyPoly- merase)剪切体大量累积，从而促进了肿瘤细胞的凋 100“L的量加入到孔中，细胞对照孔和空白孔每孔 亡[2]。前面的研究已表明PHA-767491对多种肿瘤 加入100弘L的2％的DMEM。培养48h后每：fLirt 细胞表现出了较强的杀伤力，同时对肝正常细胞毒 入20肛L的MTT(5mg／mL)，37℃孵育4h，吸去 性极低[4。5]。本研究将继续着重探讨PHA一767491 上清，每孔加入150 对多种肝癌细胞系的杀伤能力，为该药早日在肝癌 iLL的DMSO，在摇床上摇育 20min后在590