大绒鼠Eothenomy miletus微卫星多态性引物的筛选.pdfVIP

ofYunnanNormal 云南师范大学学报(自然科学版) Journal University No．2) 2013年3月一33卷2期(V01．33 mm 大绒鼠(Ep芒庇e孢oy iZe芒“5)微卫星多态性引物的筛选+ 朱万龙， 刘春燕， 张麟， 王政昆 (云南师范大学生命科学学院，云南昆明650500) 摘要：大绒鼠是横断山区的固有种。利用大绒鼠40个个体设计出12对微卫星引物，其有效等位基 too．465， 因(N。)2～5个，观测杂合度(Ho)、期望杂合度(HE)及多态信息含量(PIC)分别为o．111 o．457too．707，o．4073 too．674 1．筛选出的12对引物中Emj2～43和Emj2～54属于高度多态性 座位，其余10对均为中度多态性座位，这些微卫星引物的筛选可用于今后更进一步的种群研究。 关键词：微卫星；大绒鼠；种群结构 中图分类号： Q955 文献标志码： A 文章编号： 1007—9793(2013)02一0063—07 微卫星标记(microsatellite)，又称为短串联 重复序列或简单重复序列，是均匀分布于真核生 l材料和方法 物基因组中的简单重复序列，由2～6个核苷酸的 串联重复片段构成，由于重复单位的重复次数在 1．1 动物来源 本研究中的中缅树驹样本均为成年个体，分 个体间呈高度变异性并且数量丰富，因此微卫星 别来自云南省昆明市禄劝县屏山镇(海拔 标记的应用非常广泛[1-6]，被广泛应用于生物遗 传作图、群体遗传研究、个体间亲缘关系鉴定等方 7)灌丛；剑川县石龙村(海拔2500m，北纬26。15’～ 面，且微卫星的应用还可以推测或预测种群的动 态变化，此外对阐明种群的历史进程具有重要的 2750m，北纬26。40’23．5¨，东经99。．48741．3”)灌 意义‘7—8|． 大绒鼠(疡地P”omy5miZ甜“5)分布于横断丛，取其肝脏组织于75％酒精保存。 1．2基因组DNA的提取 山地区[卜10]，属于田鼠亚科(muicofin以P)动物。 组织进行脱醇后用标准蛋白酶K／酚：氯仿： 绒鼠自化石发现于横断山以来，至今未见关于该 异戊醇方法提取基因组DNA[13|．利用4只云南 类物种大规模扩散和迁移的报道。对该亚科动物 研究有利于对上新世——第四纪原始气候和环境 剑川捕捉绒鼠混合DNA进行后续试验。 的了解[1卜12]．本研究利用磁珠富集方法，从大绒1．3酶切连接反应及AFLP特异引物扩增 TCAGGACTC 用AFLP(A：5’一TAC 鼠基因组中分离筛选出微卫星位点，为进一步阐 GATGAGTCCTGAG AT一3’；B：5’～GAC 明横断山对绒鼠生存适应及