奶粉中双氰胺的检测方法（HPLC.pdfVIP

博纳艾杰尔产品应用案例 奶粉中双氰胺的检测方法（HPLC-UV 和HPLC-MS/MS 法） 北京时间 1 月25 日凌晨消息，新西兰牛奶中发现了有害物质——双氰胺。双氰胺又名二氰二 胺，缩写DICY 或DCD 。虽然国际标准未对食品中的双氰胺限量，但高剂量的双氰胺对人体是有毒 的。 本文采用天津博纳艾杰尔科技的Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管和Venusil® HILIC 液 相色谱柱，建立了奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS 快速前处理方法和LC-UV 以及LC-MS/MS 检 测方法。 1 实验部分 1.1 仪器、试剂与材料 高效液相色谱仪，涡旋振荡器，超声波清洗机，氮吹仪。 双氰胺标准品 （CAS ：461-58-5；FW=84.08 ），Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管，Venusil® HILIC 液相色谱柱，微孔滤膜，乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯，实验用水为超纯水。 NH N N NH2 H 图1 双氰胺分子式 1.2 实验步骤 提取、净化：称取 1g 试样于50mL 具塞离心管中，加入2mL 水溶解后，加乙腈定容至 10mL，超 声10min，8000r/min 离心5min，取2mL 上清液加入Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管填料， 涡旋0.5min，8000r/min 离心5min，取上清液过0.22µm 滤膜，待测。 1.3 实验条件 1.3.1 高效液相色谱法（HPLC 法）： 色谱柱：Venusil® HILIC （5μm，100Å，4.6*250mm ）； 流动相： 10mmol/L 乙酸铵（pH=4.0 ）：乙腈=10: 90 ； 波长：220nm ；进样量：10µl ；柱温：30℃；流速：1mL/min。 1.3.2 LC-MS/MS 法： （1）色谱条件： 色谱柱：Venusil® HILIC （5μm，100Å，2.1*150mm）； 流动相：0.5mmol/L 乙酸铵（pH=4.0 ）：乙腈=10:90 ；进样量：10µL ；柱温：30℃；流速：0.2 mL/min 。 （2 ）质谱条件： 质谱仪：API 4000+ ；离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测； 地址：天津经济开发区西区南大街179 号 邮编：300462 电话：022传真：022 Email ：service@ 网址： 客服：400-606-8099 博纳艾杰尔产品应用案例 CAD：8.00；CUR：10.00；GS1 ：60.00；GS2：50.00；IS ：5500.00；TEM ：500.00。 表1 双氰胺质谱信息 药物名称 监测离子对 DP EP CE CXP 双氰胺 85.1/68.1 71 10 41 6 85.1/43.1 71 10 41 6 注：带“____ ”的监测离子对为定量离子对。 2 结果与讨论 2.1 高效液相色谱法： 2.1.1 线性关系和检出限 准确称取双氰胺标准品50mg 于50mL 容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为标准贮备液； 分别量取一定量的标准贮备液，用乙腈稀释，配置成浓度为0.1µg/mL，0.5µg/mL，1.0µg/mL， 2.0µg/mL，5.0µg/mL 和10.0µg/mL 的标准溶液，按照上述色谱条件，依次进样检测。以标准溶液浓 度为横坐标，峰面积为纵坐标，拟合线性方程，结果见表2 ：