·论著·7CD探针的实验合成.pdfVIP

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2017-09-14 发布于重庆
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浙江创伤外科年月第卷第期，，， !# ! $ % ’()*+,- ./01,+2 /3 41+05+6*7 801-(19 :(;10+19 !# /2=$ /=% ．． $ ·论著· ?! 7CD 人骨形成蛋白的探针的实验合成黄宏杰平飞云【摘要】目的利用分子生物学实验技术合成并标记人骨形成蛋白（）的探针。方法从人髁状突骨折标本中提取总 ?! ’@AB?! 7CD ，用逆转录聚合酶链式反应（）方法，扩增出成熟肽编码区基因的片段，将其插入质粒中，并转化到大肠 ED E4?BFE ’@AB?! 7CD GHIA?4 杆菌；挑选阳性克隆培养，提取重组质粒，并作核苷酸序列分析；用限制性内切酶单酶切后，再经地高辛标记检测试剂盒随机引物法标记，合成地高辛标记的@AB?!7CD 探针；利用这一探针作人颌骨成骨性骨肉瘤标本中@AB?!5ED 表达的原位杂交研究，以鉴定探针的可靠性。结果通过实验方法合成了’@AB?!7CD 探针，利用这一探针的原位杂交研究证实颌骨成骨性骨肉瘤中有@AB?!5ED 表达。结论自行合成并标记的人@AB?!7CD 探针，性状稳定、可靠，能够应用于@AB?!5ED 表达的原位杂交研究。【关键词】人骨形成蛋白?! ；基因克隆；原位杂交；骨肉瘤【中图分类号】 EJ#!=J 【文献标识码】 D !#$%’(’ )*+ ,-)./)$(0* 12 3/4)* 50* 6078%09*$(: ;70$(* =?@ ;70AB! #$% ’()* +,-./%0,+12(-3,4 5678,(7 ’9 :7’857’+’)1-;, :,=’( ’?4 +75@-5()A’2 BCDDCE-F+(5 【】（） CA’$7):$ DAEB:$(-B 4’( G01G/K( /3 6’*K K60L9 *K 6/ K9,6’(K*M( CD G1/;( /3 ’05+, ;/,( 5/1G’/-(,(6*7 G1/6(*, ?! ’@AB ?! = 6B$F0+’ IN61+76*,- 6/6+2 ED 31/5 ’05+, 7/,L92( K+5G2(= ’@AB?! 7CD 32+,O*,- ’@AB?! 5+601( 1(-*/, P+K +5G2*3*(L ;9 E4?BFE=4’( ’@AB?! 7CD P+K 6’(, *,K(16(L *,6/ 72/,*,- Q(76/1 GHIA?4R871((,*,- ;9 P’*6( +,L ;20( 72/,( +36(1 61+,K3/15*,- 6’( 1(7/5;*,+,6 G2+K5*L *,6/ I=7/2*=K61+*,