热带假丝酵母产生子囊孢子的条件及单倍体分离的研究.pdfVIP

基因组学与应用生物学，2013 年，第32卷，第2 期，第201-206 页 GenomicsandAppliedBiology,2013,Vol.32,No.2,201-206 研究报告 ResearchReport 热带假丝酵母产生子囊孢子的条件及单倍体分离的研究 1,2 1,2 1 1 1 1 1* 严小琼 黄思思 覃香香 周玉恒 蔡爱华 陈海珊 张厚瑞 1中国科学院广西植物研究所,广西植物功能物质研究与利用重点实验室,桂林,541006;2广西师范大学,生命科学学院,桂林,541004 *通讯作者, zh-hr@ 摘 要 本文研究了诱导热带假丝酵母子囊孢子产生和子囊破壁的条件，以及单倍体分离和鉴别方法。结 果表明：NaAc、KCl 这两种成分即可满足热带假丝酵母的产孢营养要求，在含有NaAc8.2g/L、KCl1.8g/L 的 琼脂培养基中，28℃培养7d，热带假丝酵母细胞的产孢率可达到47.5%；单纯使用蜗牛酶对破除热带假丝酵 母子囊壁的效率甚低，酶解液加入适量的石英砂同时振荡处理4h 左右，可以显著提高对热带假丝酵母子囊 破壁速率。用这种方法处理，绝大多数子囊壁均可破除。子囊破壁处理后再以52℃处理10min杀死残余的 营养体细胞，分离物的单倍体孢子比例可由灭活处理前的48%，提高到76%以上。 关键词 热带假丝酵母,产孢条件,子囊孢子 StudyonSporulationandHaploidSeparationConditionsofCandidatropicalis Yan Xiaoqiong 1,2 Huang Sisi 1,2 Qin Xiangxiang 1 Zhou Yuheng 1 Cai Aihua 1 Chen Haishan 1 ZhangHourui 1* 1GuangxiKeyLaboratoryofFunctionalPhytochemicalsResearchandUtilization,GuangxiInstituteofBotany, GuangxiZhuangAutonomousRe- gionandtheChineseAcademyofSciences,Guilin,541006;2CollegeofLifeScience,GuangxiNormalUniversity,Guilin,541004 *Correspondingauthor,zh-hr@ DOI:10.3969/gab.032.000201 Abstract Theconditionsofsporulationandenzymatichydrolysisof Candidatropicalisaswellastheseparation andidentificationmethodsofhaploidwereresearchedinthisresearch.Theresultsshowedthattwoingredients, whichareNaAcand KCl,canmeetthenutritionalrequirementsofthesporulation,when Candidatropicaliswas culturedinthemediumcontainingtheNaAc8.2g/L,KCl1.8g/L,7daysat28℃,sporulationratecouldreach47.5%; Itisineffectivenesswhenonlyuseshelicasetobreaktheascuswallof Candidatropicalis,whileifrightamountof quartzsandisadded,andshakingculturefor4hours,thesporulationratewasimprovedsignificant.Withthis method,themajorityofascuswallofCandidatropicaliscouldbebroken.Heattreatment10minat52℃afterenzy- matichydrolysisandtheremanentvegetativecellswerekilled,theproportionofisolateshaploidsporecouldreach from48%to76%. Keywords Candidatropicalis,Sporulationconditions,Separationascospore