转基因兔与克隆兔高效胚胎移植体系的建立.pdfVIP

172 实验动物与比较医学 LaboratoryAnimalandComparativeMedicine doi：10．3969~．issn．1674-5817．2011．03．004 转基因兔与克隆兔高效胚胎移植体系的建立 李海滨 ，田江天z，宋 军，，赖良学3顾为望 (1．南方医科大学实验动物中心暨比较医学研究所，广州 510515； 2．吉林大学畜牧兽医学院，长春 130062；3．中国科学院广州生物医药与健康研究院，广州 510530) 摘『要】 目的 建立高效的转基因兔和克隆兔的胚胎移植实验技术平台。方法 通过外科手术移 植的方法将受精胚胎、转基因胚胎和体细胞核移植胚胎分别移植到同步发情或异步发情的受体兔 输卵管。结果 移植受精胚胎、转基因胚胎和体细胞核移植胚胎的受体兔怀孕率分别为 100％、 66．67％、36-36％，产仔数分别为 19、24及 l7只，仔兔的成活率分别为90．48％、92．31％、17．65％。 出生仔兔与移植胚胎数的比率分别为43．75％、21．31％、8．54％。结论 成功建立了高效的转基 因兔和克隆兔的胚胎移植的实验技术平台。 关『键词】兔；胚胎移植；超数排卵；受精卵胚胎；转基因胚胎；克隆胚胎 [中图分类号]R．33Q95．33 [文献标识码]A [文章编号]1674-5817(2011)03—0172—06 转基因动物是 目前生物技术研究中热点课题之 1 材料与方法 一 ， 自从 1985年Hammer利用显微注射法将小鼠金 1．1 实验动物 属硫蛋白基因启动子与人生长激素基因融合的质粒 普通级新西兰 白兔，雌性，6～8月龄 ，体重 导入到家兔原核胚的雄原核中获得了表达人类基因 3～4．5kg；雄性，7—10月龄，体重 3．5～4．5kg， 的转基因兔研究起，转基因兔为人类疾病的研究提 南方医科大学实验动物中心提供[SCXK(粤)2006— 供了新的模型动物lll。目前，获得转基因动物的 00151。均饲养在室温 l8～25℃、湿度40％～70％、 常用方法有原核注射法 3【】、逆转录病毒感染法 、 按 12／l2h控制光照的普通环境中。所有动物的饲 精子载体法 5【J、胚胎干细胞法[6J和体细胞核移植方 养管理和使用均得到南方医科大学实验动物管理委 法[，不管采用哪种方法进行研究，首先需要进行 员会和实验动物福利和伦理管理委员会的许可，所 胚胎移植 。虽然一百年前WalterHeape就完成了兔 有的动物实验均按照实验动物使用操作规程进行操 的胚胎移植8【j，但是移植胚胎的好坏、受体兔的优 作 [SYXK(粤)2006．0074]。 劣以及移植方法的选择均可能影响胚胎移植的效率， 1．2 受精胚胎的制备 而胚胎移植是转基因克隆兔技术成败与否的关键一 选择拟作供体的雌兔，用孕马血清促性腺激素 环，因此，为建立成功高效的转基因兔(采用慢病毒 和人绒毛膜促性激素PMSG+hCGt12~14](宁波第二激素 载体法 ¨)和克隆兔胚胎移植平台开展了本研究。