维生素A胶丸含量测定——UV三点校正法和HPLC法的比较.pdfVIP

药分自主实验报告 维生素A 胶丸含量测定 ——UV三点校正法和 HPLC 法的比较 楼斯悦 3061904059 朱灵芝 3061904065 【摘要】目的：用 UV 三点校正法和 HPLC 法两种方法测定维生素 A 胶丸含量，并对两种 方法进行比较。方法：1）紫外三点校正法，称取胶丸内容物适量以环乙烷作溶剂，稀释至 9-15 单位/毫升，扫描测定最大吸收波长，在规定波长下测定吸光度；2）HPLC 法，流动相： 甲醇：水 97 ：3，紫外检测波长 326nm，C18 反相色谱柱，流速 1.0ml/min。结果：紫外 分光光度法测得维生素 A 胶丸的含量为 107.0％，破坏过的胶丸不适用第一法计算含量； 高效液相色谱法测得胶丸含量为 101.4%，经破坏过的胶丸含量为 122.4%。结论:正常贮存 条件下的维生素 A 胶丸含量合格。经强光照射过后的胶丸含量不合格。 关键词：维生素A 胶丸 UV 三点校正法 HPLC 法 含量测定 维生素A ,又称视黄醇,在体内具有促进细胞增生和分化、提高免疫力、视觉等生理功 能。此外,维生素A 还与骨质代谢和缺铁性贫血有关。维生素A 缺乏在世界范围内仍是严重 危害人民(特别是儿童) 健康的营养缺乏病[1]。目前 2005 版药典中维生素A及其胶丸的含量 测定方法为紫外三点校正法、第一法适用于纯度较高的维生素A，但对一些纯度不高的样品 第一法并不一定适用，只能用第二法。第二法的样品前处理过程包括皂化、干燥等步骤，较 为麻烦。因此，建立一种适用性更广的维生素A含量测定方法显得极为重要。近几年来，较 多的文献报道了采用HPLC法测定一些食品、药物或饲料中的VitA含量。本次实验在文献查阅 的基础上，设计了HPLC实验方案，对维生素胶丸含量进行测定。比较UV法和HPLC法的优缺点。 1 仪器和试药 1.1 紫外三点校正法 光束紫外可见分光光度计 TU-1901 （北京普析通用仪器公司），日立紫外分光光度计， meltter 分析天平，环乙烷（AR ），乙醚（AR ），维生素A 胶丸（2.5 万单位，厦门星鲨 制药有限公司，批号 1.2HPLC 法 岛津 HPLC 仪，纯水滤过装置，超声仪，Meltter 分析天平，进样针，甲醇(色谱纯) ， 蒸馏水， C18 色谱柱 2 实验步骤 1 药分自主实验报告 2.1 紫外三点校正法 2.1.1 取维生素 A 胶丸 20 粒，称重，挤出内容物置干燥烧杯中，胶壳用乙醚洗涤烘干， 称重，求得胶丸内容物平均重量（注意避光）； 2.1.2 取内容物适量,加环己烷溶解并稀释至 25ml，摇匀，紧密量取 1ml 至 100ml 容量 瓶中，使其浓度为 9~15IU/ml，作为工作液。 每丸的标示量为 25000IU，则称取内容物的质量为：（0.9~1.5 ）×内容物平均质量。 2.1.3 扫描紫外吸收的最大波长，在 326~329nm 范围内，然后测定工作液在药典规定 的波长下的吸光度，最后进行计算。 2.2 HPLC 法 2.2.1 仪器准备：启动岛津高效液相色谱仪，打开 A、B 泵，走流动相至少 30 分钟，使 仪器稳定。流动相所用的水经水膜滤过并超声，方可适用。 2.2.2 色谱条件：流动相甲醇和水 97：3，流速 1ml/min，检测波长 326nm，C18 反相柱， 紫外检测器，自动定量环进样 20 微升。 2.2.3 标准液：精密称取维生素 A 对照品约 10mg, 至 100ml 容量瓶中，用甲醇溶解并 稀释至刻度，摇匀；然后精密量取 1ml 至 10ml 容量瓶，摇匀，进样前用油膜过滤。 2.2.4 供试液：称取未经破坏的胶丸内容物适量用甲醇溶解（注意尽量摇匀，可用超声 仪超声），使最终浓度约在 10 μg/ml 。另同法称取用强光照射过的胶丸内容物适量，以甲 醇配制成溶液。 2.2.5 进样：对照品及供试品溶液，分别进样 5 针，记录色谱