siRNA及其在哺乳动物中的应用.pdfVIP

四川动物 Sichuan Journal of Zoology 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2003 22 (4) siRNA 及其在哺乳动物中的应用 孙岩 ,马用信 ( 四川大学华西医院医学遗传室 ,四川成都610041) 摘要 :RNA 干扰现象已经在多种生物中发现 ,但是在多数哺乳动物中尚未发现自然存在 RNA 干扰的证据。因此 最初 RNA 干扰技术在哺乳动物细胞中的应用受到很大的限制。直到对 RNA 干扰作用机制有了较深入的了解以后 , 主要是小干扰 RNA 的发现使 RNA 干扰技术在哺乳动物中的应用得以推广。本文介绍了 RNA 干扰 ,重点描述了小 干扰 RNA 的发现、特点、现有制备方法以及应用。 ( ) ( 关键词 :小干扰 RNA small interfering RNAs , or short interference RNAs , siRNAs ;哺乳动物 ;RNA 干扰 RNA in terference , RNAi) ( ) 中图分类号:Q52 ,Q95 　　　　文献标识码 :A 　　　　文章编号 :1000 - 7083 2003 04 - 0281 - 05 1 　RNA 干扰简介 处于原先的正义链的位置 ;复合体中的核酸酶在同样 1.1 　RNA 干扰的发现 　1990 年 , 为加深矮牵牛花 位置对 mRNA 进行切割 ,这样又产生了长约 2123 个 ( petunias ) 的紫色 ,Jorgensen 等导入了一个强启动子 核苷酸的 dsRNA 小片段 , 它们再与核酸酶形成复合 控制的色素基因。可是结果与预期相反 ,许多花瓣颜 体 ,继续对目的 mRNA 进行切割 ,从而使目的基因沉 色并未加深 ,反而呈杂色甚至白色。这是由于转基因 默 ,产生 RNAi 现象[ 1 ,2 ] 。目前一些 RNAi 相关的酶或 和同源的内源基因的表达都被抑制了 ,Jorgensen 把这 基因已在包括植物、线虫、果蝇和哺乳动物中被分 ( ) 离[ 3 ,4 ] 。 个现象命名为共抑制 cosuppression 。1998 年 , An ( ) drew Fire 等在秀丽隐杆线虫 C. elegans 中的研究证 明 ,在正义 RNA 阻断基因表达的试验中 ,真正起作用 的是双链 RNA ( doublestranded RNA ,dsRNA) 。这种 双链 RNA 对基因表达的阻断作用被称为 RNA 干扰 (RNA interference , RNAi) 。从发现转基因植物中的 共抑制现象到在线虫中明确 RNA 干扰经历了近十 年。随后的观察研究表明 , RNAi 现象广泛存在于真 菌、拟南芥、水螅、涡虫、锥虫、线虫、斑马鱼、果蝇、小鼠 等大多数真核生物中 ,是它们抵御病毒的感染、抑制转 座子移位的一种机制[ 1 ] 。 1. 2 　RNA 干扰可能的作用机制 　RNA 干扰现象发 现后 ,成为生命科学的研究热点 , 同时增进了对 RNAi 作用机制的深入了解。根据现有证据 , RNAi 的机制 ( ) 可能是 见图 1 : 由于 RNA 病毒入侵、转座子转录、基 因组中反向重复序列转录等原因 , 细胞中出现 dsR NA ,一种 dsRNA 特异的核酸内切酶 ,即 RNa