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河北畜牧兽医 规模养猪 仔猪病毒性腹泻的诊断 马海秋 （华牧牧业责任有限公司% 河北石家庄 ’ $） 猪传染性胃肠炎病毒()*+,- 、猪流行性腹泻病 胞、猪肾细胞系、原代猪唾液腺细胞、猪甲状腺细胞 毒(.+/,- 、猪轮状病毒(0,- 三种病毒是目前引起仔 和猪睾丸系。接种病料后一般培养215: 收毒，如无 猪腹泻的主要的肠道病原。这三种病原有类似的传 细胞病变 (;.+- 或 ;.+ 不明显，盲传 21’ 次，用 染途径和临床症状，同时也可能混合感染，临床上较 )*+, 荧光抗体染色法检查细胞培养液，或用已知 难区别，所以对此三种病毒性腹泻病的诊断更多地 有 ;.+ 的牛腹泻———黏膜病病毒进行干扰试验，也 还依赖于实验室。本文即综述了此腹泻病常用的实 可用电镜直接观察。如已出现;.+ ，即可在细胞培养 验室诊断方法。 物上测定毒力，并作病毒鉴定。 $ .+/ !4! 免疫血清学技术 !! 病原分离与鉴定 人工感染仔猪是最常用 !4!4$ 中和试验最为常用，应用细胞培养适应 的方法。一般选用!12 日龄不喂初乳的仔猪，将患 毒，在微量滴定板上作;.+ 抑制和空斑减数试验。 病猪小肠组织及肠内容物做成悬液，加入青链霉素， !4!4! 荧光抗体试验既可检测抗原又可检测抗 室温放置 $3 ，接种仔猪，如试验仔猪发病，取其小肠 体。)*+, 荧光只见于感染细胞的胞浆内。 组织作直接荧光染色检查或免疫组化试验。采用直 !4!42 免疫电镜能非常灵敏地检出)*+, ，还能 接电镜法可在腹泻猪粪便中检出.+/, 颗粒。 对临诊样品和细胞培养物进行病毒的血清学检查。 $4! 免疫血清技术 !42 分子生物学方法 $4!4$ 免疫荧光染色用直接免疫荧光技术检测 随着分子生物学技术的发展和对)*+, 序列的 猪病料中的.+/, 是可靠的特异性诊断方法，最有 分析，通过分子克隆制备了;/9 探针，可用斑点 实际应用价值。检验病料一般采取腹泻后#53 之内 杂交试验来检测细胞培养物和粪便样 品中的 的小肠，以空肠中段为最好，一般 $1!3 可得出结 )*+, 。 果。间接免疫荧光试验和阻断免疫荧光试验可用于 2 0, 抗体的检测。 24$ 病原分离与鉴定 猪轮状病毒排出的最 $4!4! 免疫电镜可用已知的高免血清确定未知 高浓度是在腹泻开始后的!#3 内，应于此期采集粪 病毒，也可用已知的.+/, 诊断病猪恢复期的血清。 样或肠内容物分离病毒。 如可疑病料中含有.+/, ，由于抗原和抗体的特异 24! 电镜观察 电镜已被广泛用于轮状病毒 性结合，在电镜下可见晶格状排列的病毒粒子，并可 的检测，并仍被作为检测的标准方法。 见毒粒间的抗体桥。 242 免疫血清学技术 $4!42 酶联免疫吸附试验 已研制出许多种 2424$ 免疫电镜 在粪滤液中加入免疫血 +6789 方法，可作猪粪便中.+/, 抗原和血清中特 清，使病毒粒子与抗体结合而发生凝集，电镜检查 异性抗体的检测，其不仅灵敏度高而且可靠，适用于