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第 32卷 第4期 华南农业大学学报 VoJ.32.No.4
2011年 l0月 JournalofSouthChinaAgriculturalUniversity 0et.2011
表面展示猪 圆环病毒 2型衣壳蛋 白
的重组杆状病毒的构建
程晓亮,林文耀,叶 煜,陈筱薇,严常燕,廖 明,樊惠英
(华南农业大学兽医学院,农业部动物疫病防控重点实验室,广东广州 510642)
摘要:利用PCR方法扩增猪圆环病毒2型核定位信号区缺失的Cap蛋白基因,将其亚克隆人杆状病毒表面展示质
粒 pBACsurf-1的gp64信号肽和 gp46 成熟蛋 白之间.将此融合片段亚克隆到质粒 pcDNA3.1(+),获得重组质粒
peDNA3.1一gp64一dCap.然后将含有 CMV启动子,gp64及 dCap的基因片段克隆到杆状病毒转移质粒 pFastBae—V,得
到重组质粒pFastBac—dCap—V.然后将此转化DH10Bac感受态细胞 ,获得的重组穿梭质粒Bacmid—dCap—V,经脂质体
转染St9细胞,获得重组杆状病毒Ac—dCap—V.该重组病毒感染Sf9细胞后可以产生典型的细胞病变,转导哺乳动物
细胞后经间接免疫荧光试验证明,该重组杆状病毒成功转导哺乳动物细胞并表达 dCap蛋 白.
关键词:杆状病毒表面展示系统;猪圆环病毒2型;dCap基因
中图分类号:$852.65 文献标志码:A 文章编号:1001—411X(2011)04—0096—05
Construction ofRecombinantBaculovirusSurface—Displayedthe
CapsidProteinofPorcineCircovirusType2
CHENG Xiao—liang,LIN Wen—yao,YE Yu,CHEN Xiao·wei,YAN Chang—yan,LIAO Ming,FAN Hui—ying
(KeyLabforPreventionandControlofAnimalDiseaaesoftheMinist~ofAgriculture,Collegeof
VeterinaryMedicine,SouthChinaAgriculturalUniversity,Guangzhou510642,China)
Abstract:Theopencapsid(Cap)proteingenewithoutnuclearlocalizationsignal(NLS)ofporcineeirco—
virus2(PCV2)wasamplifiedbyPCRandsub—clonedintopBACsurf-1betweentheupstreamgp64signal
sequenceanddownstresm gp64maturedomain.ThefusiongenecontainingdCapandgp64 wasinserted
intopcDNA3.1(+)toconstructtherecombinantplasmidpcDNA3.1一gp64-dCap.AfragmentoftheCMV
promoter—gp64一dCapfusiongenecassettewasexcisedfrom pcDNA3.1一gp64一dCap andinserted intothe
baeulovirustransfervectorpFastBac-V toconsturcttherecombinantplasmidpFastBac—dCap—V.Itwasfol—
lowedbythetransformationofplasmidintoEscherichiacoliDH10Baccompetentcellstoobtaintherecom-
binantshuttlevectorBacmid—dCap—V.Eventually,therecombinantBacmidwastrans
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