马铃薯StERF3超量表达载体转基因植株矮化原因初探.pdfVIP

第 30卷第 6期 华 中 农 业 大 学 学 报 Vo1．30 No．6 2011年 12月 JournalofHuazhongAgriculturalUniversity Dec．201l，663~666 马铃薯 StERF3超量表达载体 转基因植株矮化原 因初探 刘 影 田振东 宋波涛 柳 俊 谢从华 国家蔬菜改良中心华中分中心／华中农业大学湖北马铃薯工程技术研究中心，武汉 430070 摘要 基于马铃薯 StERF3超量表达载体转基因株系中出现了部分矮化植株，通过基因表达量检测、组织 切片分析和转基 因试管苗添加外源生长调节剂等方面对矮化原 因进行了初步探讨 。结果表明：矮化株 中 StERF3基因表达比对照降低 ；矮化株木质部和薄壁细胞明显变小 ，栅栏组织和海绵组织较致密；培养基中添加 0．5mg／mLGA3能够使矮化株明显增高，但添加 IAA效果不明显 ；转基因矮化株含有 3～4个拷贝，多拷贝导致 了目标基因的沉默；在干涉株系中StERF3基因表达比对照降低，但并未出现矮化株；推测植株矮化并不是 由于 StERF3表达量引起，很可能是由于多拷贝插入导致与GA。合成或其调控有关基因受到干扰引起。 关键词 马铃薯；转基因；StERF3基因；矮化；超量表达载体 ；基因沉默 中图分类号 S532．53 文献标识码 A 文章编号 1000-2421(2011)06—0663—04 转基 因过程中经常会出现一些表型变异，例如 化株系 StERF3一J-a及 生长正 常 的转基 因植株 在转基因拟南芥、水稻、番茄中表现出植株矮化、超 StERF3一J-11、19和非转基因对照J。 高、畸形、叶形皱缩、叶色变化、叶丛生等变异性 1．2 矮化株表型观察 状[1]。这些表型变异有可能是 目标基因本身转基 将供试材料在附加 3 蔗糖的MS固体培养基 因超量表达或干涉抑制导致基因沉默而引起的性状 上进行离体扩繁，于光照强度 2500lx，光周期 16 变异 ，也可能是 由于T—DNA插入到基 因组 中，导致 h／d，温度 20℃培养室生长 1个月。一部分试管苗 其他基因激活或失活引起[5]。我们在研究马铃薯 用于添加外源生长调节剂生长试验 ；一部分于华中 乙烯应答因子基 因StERF3功能时，发现超量表达 农业大学蔬菜改 良中心隔离大棚塑料钵 中盆栽 载体转基因株系中出现了6株矮化植株，这些转基 (3月)，每份材料种植 5钵，试验期间的土壤、肥料、 因株系含有 3～4个拷贝，试管苗和温室盆栽时都表 水份同常规管理，进行株高、株型、色泽、叶形等方面 现出明显的矮化现象，表现为植株矮小、茎节缩短、 的观察 。 叶片变小。为探明矮化是否是由于StERF3基因本 1．3 基因表达量分析 身超量表达引起，本试验从基因表达量检测、组织切 采用 RT-PCR方法，通过抽提矮化株和生长正 片分析和转基因试管苗添加外源生长调节剂等方面 常的转基因植株和对照株 的 RNA，进行反转录 对矮化原因进行初步探讨。 PCR，确定其表达量差异。 逆转录使用 TOYOBO公司的逆转录酶，反应 1 材料与方法 体系为25 L，于0．25mL管中加 3z／gRNA(约0．5 1．1 试验材料 L)，4 L 0ligod(T) (25pmol／~L)，12 I 表现矮化的鄂马铃薯 3号 (E3)超量表达载体 DEPC ·HzO，用枪头吹吸几次混匀 ；65℃ 孵 育 转基 因矮化株系 SERF3一E3—42、43、46、62、64，生 5min，立 即置于冰上 1min；加 1 L逆转录酶 ， 长正常的转基因植株 StERF3一E3—17、69和非转基 5 L5×Buffer，2 LdNTP(10mmol／L)，0．5I上L 因对照E3。矮化转心乌 (J)超量表达载体转基因矮 RNA抑制剂，PCR仪中42℃孵育