补肾方药对皮质酮损伤型大鼠海马神经细胞形态结构的影响.pdfVIP

上海中医药大学学报 第23卷 第6期 2009年 11月 。39· ■匿圜 补肾方药对皮质酮损伤型大鼠海马神经 细胞形态结构 的影响 顾翠英 赵新永 金国琴 上海中医药大学 (上海 201203) 摘【 要】目的：探讨补肾方药左归丸与右归丸含药鼠血清对皮质酮(CORT)损伤型大鼠海马病理细胞模 型形态结构的影响。方法：以新生 SD乳鼠的海马组织为材料，原代培养海马神经细胞；以10“mol／L CORT处理培养的细胞制作大鼠海马病理细胞模型，并用 RU38486进行拮抗。采用NSE和 Nissl染色、 FDA／PI、SYTO．13／PI双重染色法等观察模型细胞形态结构变化及左归丸与右归丸含药鼠血清的保护作 用。结果：与正常对照组比较，加入 10 mol／LCORT以处理培养的细胞，可使海马神经细胞明显受损，死 细胞增多；左归丸与右归丸含药鼠血清均可使蓝色荧光的活细胞显著增多，呈红色荧光的死亡细胞明显减 少。结论：加入 10 mol／LCORT处理神经细胞可以制作海马病理细胞模型，补肾方药左归丸或右归丸含药 血清对 CORT损伤型海马病理细胞模型有明显的保护作用。 【关键词】 补肾方药；皮质酮；海马神经；细胞培养 【中图分类号】 R285．5；R338．1 【文献标志码】A 【文章编号】1008—861X(2009)06-0039-05 海马是中枢神经系统中与学习记忆功能密切相 1 材料与方法 关的最重要脑分区，海马区域存在高浓度糖皮质激 素受体(GR)，在衰老过程中最易遭受血浆高浓度糖 1．1 实验动物 海马神经细胞原代培养采用新生 皮质激素的毒性作用，引起海马结构与功能受损，因 24h的sD乳鼠，SPF级，雌雄不分；制备药物血清采 而有学者推测这可能是学习记忆能力衰老性退化的 用350g左右的sD雄性大鼠，SPF级，均由上海中 重要原因之一 ．。本课题组以往研究发现：老年大 医药大学实验动物中心提供。 鼠下丘脑一垂体 一肾上腺(HPA)轴功能呈现异常 1．2 方药及含药鼠血清制备 左归丸和右归丸均 亢进 ，血浆皮质酮(CORT)浓度异常增高，补肾方药 取 《景岳全书》原方。右归丸：熟地24g，山药 12g， 左归丸和右归丸能明显降低老年大 鼠异常增高的 枸杞 12g，山茱萸9g，菟丝子 12g，鹿角胶 12g，杜 CORT水平 ，延缓老年大鼠学习记忆功能的退化 。 仲 12g，当归9g，肉桂 12g和制附子 l8g；左归丸： 本文在以往整体实验基础上，用新生 24h的SD乳 熟地24g，山药 12g，枸杞 12g，山茱萸 12g，川牛膝 鼠海马组织作材料，体外原代培养海马神经细胞后， 9g，菟丝子 12g，鹿角胶 12g和龟胶 12g。各中药 加入高浓度CORT以损伤神经细胞制作海马病理细 饮片购 自上海华宇中药饮片有限公司。将各方药按 胞模型，并利用 GR拮抗剂(RU38486)进行干预， 传统方法水煎，左归丸和右归丸药液含生药量分别 从形态结构上观察 CORT对海马神经细胞的毒性作 为 1．43g／ml和 1．15g／rnl，冷却后4~C保存备用。 用，以及补肾方药——左归丸或右归丸的保护作用。 将 SD雄性大鼠随机分为3组：正常对照组、左 归丸组和右归丸组，各9只。左归丸组和右归丸组 大鼠，分别按l临床60kg体质量成人用药量的l5倍