DNA改组的最新动态及应用前景.pdfVIP

中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology，2009，29(10)：92—97 DNA改组的最新动态及应用前景 术 单世平 夏立秋h 丁学知 刘石泉’ 张友明 (1湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学湖南省重点实验室 长沙 410081) (2湖南城市学院化学与环境工程系 益阳 413000) 摘要 DNA改组(DNAshuffling)是 目前最方便、有效的一种分子水平的体外定向进化技术，该技 术同倾向错误PCR(Error—pronePCR)相结合，通过对单基因或相关基因家族的靶序列进行多轮 随机诱变、重组和高通量的筛选，可以有效富集正突变，去除负突变，提高突变文库的丰度，创造 新基因和获得期望功能的蛋 白质。DNA改组技术已在新药物等领域取得了广泛的应用，极大地 推动了现代生物科学和生物技术的发展。该技术同计算机强大的数据分析系统相结合，将会为 后基因组学的发展提供强有力的技术平台。 关键词 DNA改组 倾向错误PCR 基因家族 后基因组学 中图分类号 Q8l9 DNA改组是 由美国的Stemmer于 1994年首先提 化学方法随机片段化 ，由于这些小片段之 问具有一定 出，经后人的不断创新和改进，现已发展成为比较完善 的同源性，通过无引物 PCR和有引物 PCR组装成全长 的技术体系 。作为一种高通量的突变和筛选技术， 的嵌合体基因即嵌合体文库 “。然后对嵌合体文库 不仅可以实现基因序列的点突变，还可以实现其它突 进行高通量或超高通量的筛选，选择具有改进功能或 变技术不能实现的基因片段插入、缺失、倒转和整合 全新功能的突变体作为下轮 DNA改组的模板 ，重复上 等，而且可以反复改组，实现突变的优势积累效应 。 述步骤，进行多轮改组和高通量的筛选，直到获得理想 现阶段该技术以无以伦 比的优越性 已发展成为 比较普 的突变体 。改组原理见图1，其具体技术路线参 遍的研究核酸和蛋白质体外定向分子进化的一种强有 照文献 [12]。 力的技术 “。并以强大的生命力，已在基础理论研 SingleSequenceor 爹 孽 究 、医药研究和工业酶改造等方面取得了令人瞩 目的 SequenceFanfily 成就 卜。本文结合当今该领域的最新研究动态，概述 lmna。mhsmen 了DNA改组的基本原理和技术路线，着重介绍了DNA 广 爹 改组的创新、发展及改组过程中应注意的问题，并对其 应用前景进行了展望，以期为该技术的进一步完善提 I 供一定的借鉴作用。 Ihigh—thr。ughselecting 1 DNA改组的原理 。L多 繇 DNA改组实际上是依赖于PCR的体外诱变技术。 它是将单个基因或相关基因家族的靶序列通过物理或 图 1 DNA shuffling原理 收稿 日期：2009434—17 修回日期 ：20094)7437 Fig．1 DNA shufflingprinciple $国家 “863计划”(2006AA02Z187，2006AA10A212)、国家 自然科 学基金、国家博士点基金(20060542006)资助项 目 通讯作者，电子信箱：xialq@hunnu．edu．Crl 2009，29(10) 单世平等：DNA改组的最新动态及应用前景