α2整合素对人类骨肉瘤细胞株MMP-2表达的影响.pdfVIP

江苏医药年月第 卷第 期,, , . 论 著 整合素对人类骨肉瘤细胞株一 表达的影响 郭 文 卢 翔 吴苏稼 施 鑫 【摘要】 目的 在体外研究 整合素受体与骨肉瘤细胞胞内基质金属蛋白酶 的关 系。方法 用含不同浓度 整合素单克隆抗体的 培养基,培养 细胞 后, 法 提取细胞总, 半定量检测 的 表达。分别用含浓度为 、 、 // 的 整合素单克隆抗体的 培养基,培养细胞 后,免疫细胞化学法检测 蛋白表达。结果 随 整合素单克隆抗体抗体浓度升高,细胞 的 和蛋白表 达均降低。结论 整合素受体可促进骨肉瘤细胞 的表达,这种促进作用体现在 和蛋白水平。 【关键词】 骨肉瘤; 整合素;基质金属蛋白酶 【中图分类号【文献标识码】【文章编号】? ?,。 , .,, , 。. . , / ,? ,/ 。【 , . .. 一 . ;;, ,: . . 骨肉瘤是一种起源于间叶组织的骨原发性恶性 内外尚无有关整合素 对骨肉瘤细胞侵袭性影响 肿瘤, 年生存率低于 ¨。整合素 及其相关机制的报道,本研究通过使用整合素 蛋 是整合素分子家族中重要的 亚单位,是细胞与细 白封闭抗体拮抗整合素 作用,观察其对人类骨肉 胞之间,尤其是细胞与细胞外基质 瘤 细胞分泌的 活性及 的影 , 不可缺少的黏附分子 。基质金属蛋 响,探讨整合素 与 的关系,初步阐明整 白酶, 是癌 合素对骨肉瘤细胞作用的机制。 细胞在迁徙、浸润所必需的胶原水解酶 。 材料与方法 一 因能降解结缔组织及细胞外基质大分子,所 、材料 以在肿瘤浸润及转移过程中发挥重要作用。目前国 人类骨肉瘤 细胞株购自上海生命科学 院; 整合素单克隆抗体购自美国 公司;胎 基金项目:南京军区“ 一五”计划课题基金资助项目 批准号: 牛血清购自杭州四季青生物材料公司; 细胞培养液购自公司;鼠抗人一 单克隆抗 作者单位:南京大学医学院临床学院南京军区南京总 医院骨科 郭 文、吴苏稼、施 鑫 ;南京大学生命科学院 卢 翔 体系美国公司公司产品; 责任作者:吴苏稼 ? :. .标记的羊抗鼠即用型 为 公司产品。: 13 2 : s u M e d , N o v e m b e r 2 0 0 9 , V 。1 3 5 N o . 1 1 2 江 蕴医药 2 QQ2 生 ! ! 月簋 3 5 鲞箍 ! ! 丛 ,Iii ! g J , 二 、 方 法 结 果 ? 一 一 1 C R . R T P R N A M M P 2 a 2 M 检 测 水 平 变 化 取 、 不 周 浓 度 G 6 3 整 合 素 单 克 隆 抗 体对 一 M M M P G 6 3 , 2 m R N A 对 数 生 长期 生 长 良好 的 细胞 消 化 后 将 细 胞 细胞 表 达 的影 响 。 1 × 1 0 m l , 7 0 . 3 3 . 5 a 2 浓 度 调 整 为 个 / 的 细 胞 悬 液 常 规 培 养 。 对 照 组 ± , 整 与 相 比 合 素 单 克 隆 一 7 0 M 细 至 9/ 6 , 取 的 人 G 6 3 M M P 2 待 胞 密度 时 培 养 瓶 中生 长 良好 人 类 抗 体 减 少 类 骨 肉瘤 细 胞 分 泌 的 M 6 3 1 0 2 5 0 ~ m l ~ G , 、 5 / m R N A 。 l O 2 5 5 0 m l d 2 骨 肉瘤 细胞 分别 用 含 、 t g 整 合 的表 达 浓 度 为 、 、 t / 的 整 g 一 a 2 D M E M 6 h 6 h M M m 素 抗 的 培养 。 对 照 组 处 理 P 2 R N A 体 液 培 养 培 养 合素单 克 隆抗 体 时 的 条带 - a ; 不 2 , 。 a c t i n 5 】 . 8 6 液除 含 整 合素 抗 体外 其余条 件相 同 之 后 用 吸光 度 与 / 条 带 吸 光 度 比 值 分别 为 ± T r i z o l R N A P C R 2 . 5 9 2 2 . 5 3 1 .1 2 1 0 . 6 1 0 . 1 法 提 取 细 胞 总 , 经 逆 后 进 行 , ± , ± 5 3 。 图 、 2 转 录 9 4 ℃ 9 4 ℃ 。 : 2 m i n , 3 0 S 扩 增 反 应 条 件 为 然 后 、 5 5 ℃ 4 5 S 7 2 ℃ 4 5 S 3 0 , 7 2 ℃ 、 进 行 个 循 环 扩 增 再 以 对 照 - 3 7 m i n M M P - 2 a t i n 延 。 c 伸 和 t 扩 增 片 断 长 度 分 别 . 3 3 0 b 6 1 9 b 1 0 1 P C R