不同类群寄生蜂卵黄蛋白的检测和免疫相关性分析.pdfVIP

昆虫学报 ,, :? 不同类群寄生蜂卵黄蛋白的检测和 免疫相关性分析 董胜张 一,叶恭银 ’,胡 萃 .中国计量学院生命科学学院,杭州 ; .浙江大学昆虫科学研究所,杭州 摘要:为了探讨寄生蜂种类与卵内蛋白质存在与否及免疫相关性,采用蛋白质电泳和 免疫印迹的方法对 科 种寄生蜂卵内蛋白进行了检测和分析。结果表明:小蜂科和姬蜂科寄生蜂与其他昆虫一样,卵内含有分子量约 为 的卵黄原蛋白;而茧蜂科寄生蜂不含有卵黄原蛋白,但存在分子量为 ~ 的多肽,且在所有供试的 寄生蜂卵内均存在一个分子量约为 的多肽。 关键词:寄生蜂;卵黄蛋白;卵黄原蛋白;免疫相炎性; 免疫口迹 中图分类号: 文献标识码: 文章编号: ? ? ,, .,,, ; ., , ,:, ,? .。 , ,, ,? ., . : ; ; ; ;昆虫卵黄蛋白主要是由雌性脂肪体合成,然后为主的蛋白质,能满足胚胎发育所需的营养分泌到血淋巴中,被正在发育的卵母细胞所摄取或 ,; , 。 直接南卵巢合成,其主要功能是为昆虫胚胎发育提 关于寄生蜂卵黄蛋白的研究也取得了一些进 供所需的营养。大部分昆虫在卵黄发生时均能合成 展,尤其是卵黄蛋白的分子特征。等 大量的卵黄蛋白,但膜翅目寄生蜂有些种类卯内不 首次克隆了日本瘤姬蜂 却卵黄原蛋 含有卯黄蛋白或含量较少。据此,可将寄生蜂分成 白 ,的序列; 等 , 少卯黄卵和富卵黄卵和 等对蝶蛹金小蜂 两种类型。其中,前者无卵黄或很少,卵内主卵黄蛋白的亚基组成、分子特性、体内的表 要是脂类物质,难以满足胚胎发育所需的营养,须 达动态和内分泌调控等进行了较系统的研究。目 从寄主中获取营养;后者与大多数昆虫一样,卵除 前,在 中已经登录了 种寄生蜂 的基因序 含较多脂类物质外,还富含以卵黄磷蛋白 , 列,其中包括日本瘤姬蜂、温室粉 基金项目:浙江省自然科学基金项目;国家自然科学基金项目;瑞典国际科学基金? / ? 作者简介:董胜张,男,年 月生,安徽六安人,博士,研究方向为昆虫生理生化与分子生物学, ? :? . 通讯作者, : .. 收稿日期 : ? ;接受日期 : 期 董胜张等:不同类群寄生蜂卵黄蛋白的检测和免疫相关性分析虱蚜小蜂 、蝶蛹金小蜂和丽蝇蛹集 泳和免疫印迹的方法对不同类群寄生蜂卵内蛋白性 金小蜂 。这些研究的深入,为从 质进行分析,明确不同类型寄生蜂卵内蛋白质的特 分子水平研究寄生蜂卵黄蛋白的合成调控机制及其 性及其免疫相关性。 生殖策略提供了参考。 虽然,关于寄生蜂卵黄蛋白国内外在部分种类 材料与方法 中已经进行了一些研究,但关于寄生蜂种类与卵内 蛋白质存在与否及卵黄蛋白性质的关系未能明确。 . 供试昆虫 鉴于此,在我们前期研究的基础上,采用蛋白质电 本实验所用的寄生蜂见表 。 表 本研究使用的寄生蜂种类与来源 结果与分析 .电泳和免疫印迹 . 寄生蜂成虫整体和卵内可溶性蛋白分析 取供试寄生蜂的雌雄整体和成熟卵巢,分别在 对 种寄生蜂雌雄成虫整体的可溶性蛋白进行电 中研磨后, × , ,离心,吸取 泳分析发现, 种小蜂科的寄生蜂 丽蝇蛹集金小蜂、 上清。上清液蛋白浓度测定后,与等体积的 × 蝶蛹金小蜂和平腹小蜂 体内均存在雌特异性蛋白, 上样缓冲液 ./? ,. ; 且分子量约为 ,而 种茧蜂科寄生蜂纵卷叶 %, %甘油, % .巯基乙醇, .%溴酚 螟绒茧蜂、菜粉蝶绒茧蜂、中红侧沟茧蜂和二化螟绒茧 兰 混合,沸水浴中煮 。处理好的样品经 % 蜂 未发现明显的雌特异性蛋白条带 图 : 。 或 %分离胶. 电泳分离后,用考马斯亮 为了进一步明确这些雌特异性蛋白是否在卵中 蓝. % , %甲醇, %乙酸 染色, 也存在,对不同类群的寄生蜂卵内可溶性蛋白进行 脱色液为 %甲醇和 %乙酸。? 电泳 电泳分析。结果发现寄生蜂卵内蛋白的条带均较 后采用 ?公司的半干电转膜系统,在恒 少,且不同寄生蜂卵内蛋白具有明显的差异性。小 压下,转移 ,所用的膜为硝酸纤维素膜 蜂科的 种寄生蜂 丽蝇蛹集金小蜂、蝶蛹金小蜂。转膜后用 %脱脂奶粉室温包被 , 和平腹小蜂 和姬蜂科的 种寄生蜂 广黑点瘤姬, . % 洗 次后,加入用包 蜂和颈双缘姬蜂 卵内存在分子量约为 的蛋 被液 :稀释的蝶蛹金小蜂多克隆抗体或单克 白条带,与雌特异性蛋白具有相同的分子量。此 隆抗体 本实验室保存 室温反应 , 洗 次 外,平腹小蜂和广黑点瘤姬蜂卵内还存在分子量 后,加入用包被液 :稀释的羊抗兔 左右的蛋白条带。但是,茧蜂科的 种寄生蜂、 室温反应 , 洗 次后,用 , , 野蚕黑卵蜂、玉米螟赤眼蜂和稻虱缨小蜂卵内仅存 , 一四甲基联苯胺显色、拍照。 在 ~ 的小分子量蛋白条带 图