低温冷冻对皮肤高分子量角蛋白表达的影响.pdfVIP

军 医 进 修 学 院 学 报 , 、‘,低温冷冻对皮肤高分子量角蛋白表达的影响 蔡 宏’,董 宁 ,姚咏明 ,李绍然 ,贾晓明 空军总医院 皮肤科,北京 ; 解放军总医院第一附属医院,北京 摘要:目的 研究皮肤低温储存后表皮层高分子量角蛋白的变化,从而分析皮肤组织细胞骨架的低温生物学效应。方法 将 新鲜成人皮肤分为新鲜组、 。 组、一 ℃组、一 组和一 ℃组,于冻存后第 天复温,运用免疫组织化学染色和电 镜观察角蛋白的改变,并用图像分析仪测定表皮组织中的含量变化。结果 随着保存温度的降低, ℃、一 、一 %组的 角蛋白均表达下降,而一 ℃组与新鲜皮肤组表达相似。结论 皮肤组织的低温损伤与细胞骨架结构密切相关,角蛋白在 该低温生物学机制中发挥着重要作用。 关键词:皮肤;高分子量角蛋白;低温 中图分类号: 文献标识码: 文章编号: ?? ? :: / .. . 网络出版时间:?: : 网络出版地址 : : . . / / /.. .. . . ,?, ? , , , , ;, , , :.: ..: ?. , , ℃ , 一%% . . . ℃ , ℃ , ℃ , 一 ℃ .. . : ; ;经典的低温生物学认为,细胞在低温条件 物酶和北京中杉金桥生物技术公司 ;英国 下主要受到来自两种因素的损伤,即溶质性损伤 组织脱水机、石蜡包埋机、石蜡切片机, 和胞内冰损伤】。研究表明细胞骨架蛋白在冷冻 日本生物显微镜,荷兰过程中发挥着重要作用,其中高分子量角蛋白透射电镜,北航 多功能真彩色病理,是其关键组成和效 图像分析系统。 应蛋白。随着细胞骨架基础研究的进展和皮肤等 实验分组和标本冻存 将皮肤组织用取皮鼓修 组织低温保存方法的改进,有必要深入研究细胞 成 .厚的均匀皮片后分成 组,新鲜皮肤组 骨架系统在皮肤组织和细胞损伤中的作用机制。 迅速以/ 中性甲醛固定,其余 组置于 抗 本实验采用光镜和电镜观察不同温度冷冻后复温 冻液主要成分为/ 二甲基亚砜和/ 丙二醇 的皮肤组织学变化,进一步评价 浸泡 后,分别在 ℃、一 ℃、一 ℃、一在低温损伤中的重要地位。 中保存。 标本复温 冻存 后取出皮片,将冻存标本 材料和方法 置于 %恒温水浴. %氯化钠溶液 中复温,标 本变软后立即取出, %甲醛固定用于免疫组织化 材料 病人烧伤整形术后所余大腿部韧厚皮, 厚约 .? . ,大小约 × 的皮片若干取 学染色,或浸泡于 ℃戊二醛.%、 . 中固 皮后 内。鼠抗人 单克隆抗体、生 定用于电镜标本制作和观察。 物化学兔抗鼠抗体、链霉亲和素标记辣根过氧化 免疫组织化学染色和电镜观察 将复温后标本 用 / 中性甲醛固定,组织经梯度乙醇脱水、石 收稿日期:? 修回日期:? 蜡包埋、连续切片厚约 。每组切片行作者简介:蔡宏,女,主治医师。: . 军 医 进 学 院 学 报,’ 、单克隆抗体免疫组织化学染色:将切片脱蜡 组的中间丝呈分散状分布,并可见断裂,区域性 至水,% 室温孵育,漂洗 × 阳性信号缺失,网络状结构松散,甚至消失。表 次,枸橼酸盐缓冲液中微波修复,进口山羊 明中间丝的超微形态和结构受到冷冻温度影响, 血清工作液室温孵育 ,倾去后滴加 : 其中 的损伤较大,一 组损伤较小。 稀释的一抗;对照组滴加正常小鼠血清, 过夜, 漂洗 × 次,滴加生物素标记的相应二 抗 :稀释, ℃孵育 ,漂洗× 次,滴加链霉亲和素标记辣根过氧化物酶 :稀释,漂洗× 次,显 色,苏木素复染,自燃干燥后封片,光 镜下观察并摄像。 另取约 . 厚、皮肤组织,分别在 ℃、一 ℃、一 ℃、一 中保存 后复温, 于 .%、. 戊二醛中 ℃固定。// . 磷酸盐等渗缓冲液洗涤 次,%锇酸后固定,梯 度乙醇脱水, 包埋,常规超薄切片,醋酸 铀一柠檬酸铅双染色,透射电镜观 察并照相。 图像分析 应用北京航空航天大学与空军总医 院共同研制的 多功能真彩色病理图像分析 系统,进行染色后的病理图像形态学定量分析; 吞 同法处理电镜结果,电镜放大倍数为倍。 譬 : 统计学处理 采用统计软件,所有实验 数据以 ± 表示,单因素方差分析。 . 差异 ℃℃℃ ℃ 有统计学意义。 图 皮肤低温储存后 免疫组化半定量表达 结 果 , ± 低温储存对蛋白表达的影响 新鲜皮 ‘. , , :. 肤组织 蛋白经染色后呈红色,颜色 均匀,主要分布于细胞质,表达量丰富。 ℃组皮 讨 论 肤保存 后蛋白染色呈淡红色,已不 皮肤缺损超过 %时,自体供皮显然不足, 见明显的完整细胞结构,细胞核大部分已皱缩或溶 没有足够自体皮覆盖裸露的创面,因此必须加用其 解。与新鲜皮肤组相比,一℃