电化学免疫传感器中生物活性物质的固定方法研究进展.pdfVIP

. . 河南师范大学学报 自然科学版 第 卷 第 期 . 年 月文章编号: ?? ?电化学免疫传感器中生物活性物质的固定方法研究进展 刘 艳 ,傅英姿 ,牛卫芬.长江师范学院化学化工学院,重庆 涪陵; .西南大学 化学化工学院,重庆 摘 要:电化学免疫传感器由于具有高选择性、高灵敏度等特点,在医疗、环境检测和食品分析上应用越来越 广泛.近年来,关于电化学免疫传感器的性能和检测方法的优化研究也越来越多.本文主要介绍了当前电化学免疫 传感器研制中的核心技术即生物活性物质的固定方法的一些研究成果. 关键词:免疫传感器;生物活性物质;固定方法 中图分类号:. 文献标志码: 免疫传感器以其对分析物质的高度特异性、敏感性和稳定性,显示出广阔的应用前景.电化学免疫传感 器是将免疫技术与电化学检测相结合的一种免疫传感器,它具有选择性好,分析速度快,灵敏度高,不受样品 颜色、浊度的影响,所需仪器设备相对简单等特点,在免疫传感器研究中起着越来越重要的地位,当前已广泛 地应用在临床、医学、生物、化学、环境、农业、工业、分析等领域.免疫传感器的性能主要决定于生物活性物质 的固定化方法 ,由于生物分子具有不稳定性、易变性,而生物功能物质固定的好坏会直接影响传感器的 性能,因此生物功能物质的固定显得尤其重要,固定中必须兼顾生物物质的活性保护与电极制备的稳定性. 本文对近年来电化学免疫传感器中生物活性物质的固定方法及当前研究热点通过几例做了介绍. 电化学免疫传感器的原理 电化学免疫传感器是新兴的生物传感器的一种,其利用抗原和抗体间的高度特异性结合,导致电化学信 号的改变,由生物体成分 抗原、抗体 作为敏感元件,固定于载体膜上,构成传感器的敏感膜,即为接收器,电 极作为转换元件,传感器所感受的化学量由信号转换器将其转化为与分析物浓度有关的电信号输出,通过电 子系统进行处理和显示 . 生物活性物质的固定方法 抗体膜的制备是研制免疫传感器的关键技术之一,成膜的厚度、密度、多孔性及其电极表面的反应差异, 都有可能影响测量结果的重现性.生物功能物质的固定应满足以下条件:固定化后生物组分仍能保持良 好的生物活性;生物膜与转换器须紧密接触;固定化层要有良好的稳定性和耐用性,能适应多种测试 环境 .常用固定方法有下列几种. . 共价交联法 用交联剂起桥梁的作用,使抗原抗体 固定于电极表面的方法.通常交联剂是有两个或两个以上功能团 的试剂,常用的化学交联剂有醛类 甲醛、戊二醛等 、碳化二亚胺类、双环氧类物质以及氰异酸盐等嘲.李孝 君等利用共价交联法用戊二醛将新亚甲蓝与辣根过氧化酶标记的青霉素抗体共价键合 到玻碳电极表面,制成了一种新型的电流型青霉素免疫传感器.传感器对鸡肉中含有的青霉素检测的线性范 围是 ~,相关系数为 . ,最低检出限为 .一.电极制作过程如图 所示. 收稿日期:一 ?基金项目:国家自然科学基金 ;重庆市教委科学技术研究 作者简介:刘 艳 一 ,女,四川乐山人,长江师范学院副教授,主要从事电化学传感器研究河南师范大学学报 自然科学版 . 自组装膜法 ■■■■■■■一 叫《德叫 瓶~一 图 免疫传感器的制作流程 层层自组装技术在材料制备方面具有材料的尺寸、成分和形貌可控等特点.自组装膜是分子在溶液中 自发通过共价键、静电引力、氢键等牢固地吸附在固体基底上而形成的有序分子膜.与其他方法相比,它具有 更好的稳定性和化学结构.它简单易得,取向有序,性质多样化并能很好地保持生物质的活性.我们 妇在微 型梳状电极表面自组装辣根过氧化酶及黄曲霉素 抗体到官能化的纳米金粒子表面,通过简单的单步免 疫反应导致固定化辣根过氧化物酶与电极表面的电子传输障碍,导致测试底液电导的下降从而实现对黄曲 霉素 的定量的检测.检测线性范围 . ~一,最低检出限为 . 。,免疫传感器的制备 过程如图 所示. ∞ 十 一免疫传感器的制备过程 . 共价键合法 共价键合法最常用的有聚合物膜连接法、硅烷化法等.高会玲口 等合成了磁性 。 纳米粒子,利用 一氨基丙基三乙、氧基、硅烷 ,官 进行硅烷化,形成表面带有氨基的磁性 。 纳米复合粒子,再用戊二醛 将羊抗人免疫球蛋白 抗体 ?固定在该磁性粒子表面,通过磁力将其修饰于固体石蜡碳糊电极表 面制作成免疫传感器.与标记的二抗体 ? 结合,实现对人免疫球蛋白 的定量检测.测定线性范围为 . ~ ?~,检出限为 .? . ? 抗体共价固定在磁性 。 表面的 过程如图 .一 \ 眦嘞/ ‘ 图 ? 共价固定在磁性复合粒子上的过程示意图 . 静电吸附法 静电吸附法是以静电吸引为驱动力的自组装过程,它耗时少,固定生物材料所构成的生物膜具有保持生 物分子活性好、性能稳定和制作简单等优点,已经广泛地被接受和应用