RASSF1A、MGMT、DAPK、p16、RARβ启动子甲基化和表达与肺癌A549细胞对顺铂敏感性的初步研究.pdfVIP

中国细胞生物学学报 ChineseJournalofCellBiology2011，33(12)：1343—1349 http：／／www．cjcb．org RASSF1A、MGMT．DAPK,p16、R 启动子甲基 化和表达与肺癌 549~$胞对顺铂敏感性的初步研究 董子鹤 侯玉磊 李程华 吴永昌 陈 辉木 (重庆医科大学附属第一医院检验科，重庆400016) 摘要 有研究表叽 多个基因甲基化引起的表达改变可能是肿瘤对化疗药物敏感性的调控 因素之一。为了寻找肺腺癌A549~胞对顺铂敏感性的生物标志，该研究以肺腺癌A549细胞及对 顺铂耐受的同源A549细胞(A549一DDP)为研究对象，甲基化特异~·kPCR(MSP)检测五个候选基因 (RASSFIA、MGMT、DAPK、p16、儿i )的甲基化状态，I PcR检测候选基因在mRNA水平的表达。 结果显示：在A549~胞中，RASSF1A、MGMT、p16呈低 甲基化状态和高表达；川页铂耐受的A549一 DDP细胞 中，这三个基 因均以甲基化状态为主，mRNA表达明显下调；但 仅在A549一DDP细胞 中呈非甲基化和高表达，DAPK的甲基化和表达水平在两个细胞亚型间无明显差异。A549一DDP细 胞经去甲基化试剂(5一aza—CdR)作用后，RT_PcR检测显示：RASSF1A、MGMT．~A549一DDP细胞中的 mRNA表达水平上调，并呈明显的剂量依赖和时间依赖关系。研究结果提示，RASSF1A、MGMT、 p16、儿i 基因甲基化修饰导致的mRNA表达改变可能是调控肺腺癌A549~胞对顺铂敏感性的因 素之一。RASSF1A、MGMT、p16、 甲基化谱作为肺癌对顺铂敏感性的生物标志，值得进一 步研究。 关键词 DNA甲基化；顺铂；甲基化PCR；肺癌A549细胞株 肺癌是我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤 放射疗法的敏感性高度相关。但 目前未见这些基因 之一，大部分肺癌患者发现时已属晚期，以顺铂为基 甲基化与非小细胞肺癌对顺铂敏感性关系的研究报 础 的化学药物成了延长患者生存期的主要措施之 道 。 一 。 但对顺铂的耐受是 目前临床面临的难题，临床 基于此，本研究拟运用 甲基化特异性聚合酶链 迫切需要针对顺铂敏感性的实验室检查，来指导肺 反应(methylationspecificPCR，MSP)技术，比较肺腺 癌患者的个体化化疗 。 癌A549细胞株与其耐顺铂亚型的同源细胞株(A549一 基因甲基化是表观修饰最主要的方式，是几乎 DDP)中RASSF1A、MGMT、DAPK、p16、 共5 所有肿瘤的共同特征。来 自临床的研究显示：RASS- 种抑癌基因的甲基化状态，并进一步通过RT-PCR证 F，fRasassociationdomainfamilyIA)、MGMT(O一 实基因的异常甲基化导致其表达水平改变，期望筛选 methylguanineDNAmethyltransferase)、DAPK (death 出与肺癌A549细胞顺铂敏感性相关的基因甲基化谱 associatedproteinkinase)、p16、兄4 (retinoicacid 作为潜在的实验室指标，为进一步的研究打下基础。 receptorp)是非小细胞肺癌 甲基化修饰发生频率较 高的几种抑癌基因…，有学者通过检测血浆或体液 1材料与方法 中RASSF1A、p16等的甲基化状态。成功地进行了肺 1．1材料 癌的辅助诊断和预后判断2[_。药理学家Strathdeet】 1．1．1 细胞株 人肺腺癌耐药株A549一DDP及其亲 指出，特定DNA的启动子甲基化是肿瘤对化疗药物 本细胞A549细胞株由重庆医科大学附属第一医院邱