呼吸道合胞病毒F蛋白基因片段原核表达和初步应用.pdfVIP

第 军医大学学报 (JFourthMilMedUniv)2009，30(21) http：／／www．fmmuxb,cn 2289 · 研究原著 · 文章编号：1000-2790(2009)21—2289-04 呼吸道合胞病毒 F蛋 白基因片段原核表达和初步应用 芦 起 ，申昆玲 ，许文波 ，刘中华 ，朱 贞 ，毛乃颖 ，杨锡强 ，余加林 ，王家蓉 ，王 颖 (重庆儿童医院，重庆 400014，北京儿童医院，北京 100050，中国疾病预防控制中心，病毒病预防控制所，北京 100015) Expression ofRSV F protein fragment 的早期血清学检测方法．方法：从北京儿童医院患者鼻咽分 泌物分离的呼吸道合胞病毒 中，用 RT—PCR的方法扩增 出 anditsapplication RSVF蛋白的F1区部分基因片段 F1—1(AA137～363)，此区 LUQi，SHENKun—Ling，XUWen—Bo，LIUZhong—Hua ，ZHU 域包含 F蛋白的主要 中和抗原位点．将该基因片段克隆到 Zhen，MAONai—Ying，YANGXi—Qiang，YUJia—Lin ，WANG pMD18一T载体，将连接质粒经PCR鉴定，证实插入 目的片段． Jia— 。，WANGYing 酶切后将该片段与pET一32a表达质粒连接，用限制性 内切酶 Chongqing Children’s Hospital， Chongqing 400014， China， 酶切及序列测定，证实插入片段的正确性．利用pET一32a表达 BeijingChildren’sHospital，Beijing 100050，China， China 质粒在大肠杆菌BL21表达正确的RSVF1—1蛋 白．重组蛋 白 CenterforDiseaseControlandPrevention．National Institutef0r N端包含有6个连续的组氨酸标签，通过镍离子金属鏊合亲 VjmlDiseaseContro1andPrevention，Beijing100015．China 和层析纯化，获得了高纯度的目的重组蛋白RSVF1．1，然后将 重组RSVF1—1包被建立间接ELISA法检测人血清中的 RSV A【bstract】AIM：Toestablishrapid，sensitive，specific，cheap F蛋白IgG抗体．结果：RT—PCR产物 的片段大小为678bp． serologicaldetectionmethodsofhumanrespiratorysyncytialvirus． 经酶切和测序鉴定后，插入序列无误．WesternBlot分析显示 ： METHODS：The viruses were isolated from nasopharyngeal