pGAP-毕赤酵母表达系统的研究进展.pdfVIP

食品工程 ·Technique 技术 pGAP－毕赤酵母表达系统的研究进展 耿宏伟 侯红燕 王丕武 张建峰 （吉林农业大学生命科学学院） 【摘要】 三磷酸甘油醛脱氢酶 （GAP ） 启动子具有很强的组成型表达能力， 在近年来广泛应 用于巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白。 文中通过对pAOX1 、 pFLD1 、 pGAP 3 种表达载体的比较， 阐 述了pGAP 表达系统在生产外源蛋白中的优点及国内外现阶段的相关应用。 【关键词】 pGAP ； 巴斯德毕赤酵母； 表达系统； 外源蛋白 中图分类号： Q 786 文献标识码： A 文章编号： 1000-9868(2011)10-0159-04 随着分子生物学技术的快速发展， 越来越多的人开 萄糖等无毒性物质作为唯一碳源， 适于大规模生产外源 始关注利用微生物表达系统表达外源蛋白。 酵母是一种 蛋白， 因此受到越来越多的关注。 单细胞低等真核生物， 特性是易于培养、 繁殖快及利于 然而， 现阶段国内对于pGAP 组成型表达系统的研 基因操作， 并且能对外源蛋白进行翻译后修饰和加工、 究才刚刚起步， 对pGAP 系统还处在表面的认知上， 对 适合高密度发酵及不产生有毒物质， 逐渐受到了人们的 该系统在生产中的一些缺点也认识较少， 导致研究进展 关注， 为外源基因在真核生物中的表达提供了广阔的前 缓慢。 本文综合大量实际生产中的应用， 介绍了pGAP 景。 组成型表达系统存在的优缺点， 为进一步的研究提供支 最先用于表达外源蛋白的酵母属是酿酒酵母 （Sac- 持。 charomyces cerevisiae ）。 1981 年 Hitzeman 等人用酿酒酵 1 毕赤酵母表达载体的比较 母表达人干扰素获得成功。 此后继续用该系统表达了其 他多种真核和原核蛋白， 酿酒酵母表达系统逐渐成为分 巴斯德毕赤酵母载体包括自主复制的游离载体和整 子生物学中研究的较为透彻的酵母表达体系。 但酿酒酵 合型载体， 由于没有稳定的附加体质粒， 所以一般用整 母系统也具有局限性， 比如缺乏强有力的启动子， 表达 合型质粒作为外源基因的表达载体。 整合型载体导入酵 菌株不够稳定， 分泌效率差， 表达质粒易于丢失等。 所 母宿主细胞后通过同源重组与酵母细胞染色体基因组 以， 人们又发展了新一代的酵母表达系统——— 巴斯德毕 DNA 整合， 能在酵母中稳定存在。 现在应用于毕赤酵母 表达系统的载体有醇氧化酶 启动子表达载体 赤酵母 （Pichia pastoris ） 表达系统， 即甲醇酵母表达系 1 统。 （ pAOX1 ） 、 三磷酸甘油醛脱氢酶启动子表达载体 （ ）、 甲醛脱氢酶 启动子表达载体 （ ） 以及 近年来发现了一种甲醇型酵母即巴斯德毕赤酵母， pGAP 1 pFLD1 其细胞的过氧化物酶系中含有甲醇代谢途径的必需酶， Invitrogene 公司开发的多种表达载体， 如pPIC3 、 pPIC9 、 因而巴斯德毕赤酵母能在以甲醇为唯一碳源和能源的培 pPIC9k 、 pAO