超高压对枯草杆菌胞外蛋白酶的影响.pdfVIP

维普资讯 第 21卷 第 1期 高 压 物 理 学 报 Vo1．21，No．1 2007年 3月 CHINESE joURNAL OF HIGH PRESSURE PHYSICS Mar．，2007 文章编号：1OOO一5773(2OO7)O1一OO95一O8 超高压对枯草杆菌胞外蛋 白酶的影响 谢慧明，黄训端h。，潘 见 ，曾庆梅 ，王海翔 ，蒋业雷 (1．合肥工业大学农产品生物化工教育部工程研究中心，安徽合肥 230009； 2．安徽大学生命科学学院，安徽合肥 230039) 摘要：以枯草杆菌为研究对象，采用Box-Behnken响应曲面设计，研究了超高压处理对枯 草杆菌胞外蛋 白酶的影响以及茵体致死与胞外酶的关系。结果表 明，超高压能显著抑制枯草 杆菌胞外蛋 白酶的活性，处理过程中压力和温度是酶失活的主要因素，并且两者之间存在交互 作用 ，超高压处理时温度协 同有效。利用 DesignExpert软件建立 了胞外蛋 白酶超高压钝化 模型，决定系数R。一0．9747，调整决定系数R。，蹦一0．9421。方差分析表 明，模型显著，可应用 于钝化效果分析与预测。实验结果还表明，超高压处理后枯草杆菌的致死率与胞外蛋 白酶活 的变化相关性达到极显著水平 (R=0．933O)，胞外酶可作为超高压处理对微生物影响的一个 评价指标。 关键词 ：超高压 ；枯草杆菌；胞外蛋 白酶；响应曲面法 中图分类号 ：O521．9；Q935 文献标识码 ：A 1 引 言 高压生物科学是近年来新兴的边缘学科[1吨]，超高压作为独立的热力学因素，同热处理一样 ，可造成 微生物的损伤或致死，以及引起生物大分子的变性、蛋 白酶类失活等。利用这一原理，超高压被普遍用 于杀菌、消毒、酶类钝化、疫苗生产，以及蛋白质折叠等生物学多个领域的研究，高压生物科学与技术具 有广阔的发展前景[。]。 枯草杆菌是革兰氏阳性细菌，广泛分布于土壤、空气、水、草类及腐败物中，与人类关系密切。由于 可产生芽孢，枯草杆菌对周围环境有较强的适应能力和耐受能力，能抗拒热、辐射、静水压、渗透和化学 药物等不利因素，这给食品安全和消毒工作带来了隐患。为拓宽微生物的杀灭手段，近年来，科学工作 者采用了超高压处理办法，取得了一批成果 ，但在超高压对微生物影响机理方面的研究薄弱。本工 作以枯草杆菌为对象，研究在超高压条件下胞外蛋 白酶活的变化以及菌体存活情况，旨在为从生化和代 谢方面探索压力对微生物作用机理提供实验依据。 2 材料与方法 2．1 实验菌种 枯草杆菌[CMCC(B)635303，由安徽进出口检验检疫局生物技术中心提供。营养琼脂 (粉剂，北京 陆桥技术有限公司；其组分为：蛋白胨 10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂 15g)，37℃培养至对数期，将菌 体洗脱至无菌生理盐水中，实验时菌液浓度为 1．5×10。cfu·mL_。。 * 收稿 日期：2005-12—23；修回日期：2006-07—06 基金项 目：农产品生物化工教育部重点实验室开放基金(NKF2004005)；安徽省教育厅重点科研项 目(2004~004zd) 作者简介：谢慧明(1956一)，女，硕士，副教授，主要从事食品科学教学与研究工作． E-mail：huangxunduanwww@163．tom 维普资讯 高 压 物 理 学 报 第 21卷 2．2 实验设计 实验采用响应曲面法的Box-Behnken设计[7]，实验因素水平及编码见表 1，以超高压处理后枯草杆 菌胞外蛋白酶的活性(L，)为响应值，假设由最／b乘法拟合的二次多项式方程为 Y—B0+B11+B22+B33+B11}+B22；+B33；+B1212+B1313+B2323 (1) 式中：y