哈维氏弧菌感染的杂色鲍全组织均一化cDNA文库的构建.pdfVIP

第6卷第5期 南 方 水 产 Vo1．6．No．5 2010年 10月 SouthChinaFisheriesScience 0ct．．2010 doi：10．3969／j．issn．1673—2227．2010．05．006 哈维 氏弧菌感染的杂色鲍全组织均一化 cDNA文库的构建 姜敬哲 ，张 微 ，王江勇 ，王瑞旋 ，刘广锋 (1．中国水产科学研究院南海水产研究所 ，广东 广州 510300；2．中山大学，广东 广州 510275) 摘要：提取了哈维氏弧菌 (Vibrioha~eryi)感染的杂色鲍 (HaliotisdiversicolorReeve)总 RNA，采用 SMART方 法合成双链 cDNA，并用双链特异核酸酶进行均一化处理。割取 0．5～1．0和 1．0～3．0kb的片段分别连接 pDNR— LIB并转化大肠杆菌 (Esherichiacoli)，最终构建2种片段大小的杂色鲍全组织均一化cDNA文库。2文库库容均 在2．5×10cfum·L 左右，PCR检测阳性重组率为 100％。随机挑取 200个克隆测序，获得高质量 EST序列 174 条。组装后得到149条Unigenes，冗余率为 14．37％。序列注释结果表明，有39条 Unigene序列与已知基因高度 相似。综上所述 ，文章所建cDNA文库质量 良好，可以满足后续研究工作的需要。 关键词：杂色鲍；cDNA文库 ；哈维氏弧菌 中图分类号 ：S917．4 文献标志码：A 文章编号 ：1673—2227一 (2010)05—0037—06 Construction ofwholebodynormalizedcDNA libraryofHaliotis diversicolorReevechallengedbyVibroharveryi JIANGJingzhe ，ZHANGWei，WANGJiangyong ，WANG Ruixuan ，LIU Guangfeng SouthChinaSeaFisheriesResearchInstitute，ChineseAcademyofFsiherySciences，Guangzhou510300，China； DepartmentofEquipmentandLaboratoryManagement，Sunrat—SenUniversity，Guangzhou510275，China) Abstract：WeextractedthetotalRNAofVibrioharveyi—challengedabalone(HaliotsidiversicolorReeve)．FirstandsecondstrandcD— NAweresynthetizedbyusingCreatorSMARTcDNA ConstructionKitandfurtherhomogenizationofcDNA librarywascarriedoutwith duplex—specificnuclease(DSN)treatment．Fragmentsatlengthof0．5～1．0kband1．0～3．0kbwereligatedtopDNR—LIBand transformedintoEsherichiacolistrainDH10B．BothtwocDNA librarieshaveacapacityof2．5×10 cfu·mL ．andallofthe30ran— domlypickedcoloniesareidentifiedaspositiverecombinantplasmidsbyPCR．Furthermore，200randomlyselectedcloneswerese— quencedand174highqualityESTswereacquired，whichbelongto149unigenesincluding12contigsand137singletsafterassem