3株猪胸膜肺炎放线杆菌山东株的分离及鉴定.pdfVIP

中国畜牧兽医 2010年第 37卷第 8期 疾病防治 ·181 · 3株猪胸膜肺炎放线杆菌 山东株 的分离及鉴定 苗立中 ，李峰 ，吴忆春 ，王艳 ，林初文 ，沈志强 (1．山东省滨州畜牧兽医研究院，滨州 256600；2．山东省滨州职业学院生物工程系，滨州 256603) 摘要 ：从 山东省几个猪场 的疑似猪传染性胸膜肺炎病例中，采集病猪 的肺脏 、气管和扁桃体等病变组织，经细菌分离得到 3个分离株 BZ1株、BZ2株、BZ3株 。经过革兰氏染色镜检、菌落形态观察、培养特性试验 、生化试验 、药敏试验 、动物感染试验 等一系列细菌学鉴定方法 ，可将 3株分离菌鉴定为猪胸膜肺炎放线杆菌 。 关键词 ：猪胸膜肺炎放线杆菌 ；分离鉴定 中图分类号：$852．61 文献标识码 ：A 文章编号 ：1671—7236(2010)08—0181—03 猪胸膜肺炎放线杆菌 (Actinobacilluspleuro— 限公司、上海医学化验所试剂厂 ，药敏纸片购 自北京 pneumoniae，APP)为革兰 氏阴性球杆菌 ，有荚膜 ， 某生物技术开发公司 ，批号为 0711021。 大多溶血，APP有两个生物 型 ，生物 I型 是烟酰胺 1．4 试验动物 小 白鼠18422g，购 自山东中医药 腺嘌呤二核苷酸 (NAD)依赖性 细菌 ，有 13个血清 大学动物实验 中心。 型，是 主要的致病血 清型 (Barbara，2008)。猪感染 2 方法 APP后 ，主要表现为胸膜肺炎 ，急性暴发时，有很高 2．1 细菌分离 无菌取病料分别于加有 V 因子的 的发病率和死亡率 。一些病猪康复后常伴有慢性肺 副嗜血杆菌疫苗培养基上划线分离 ，37℃有氧或 炎，导致生长停滞且长期带菌而成为其他猪 的传染 1O C0 条件下培养 24h，观察菌落形态。纯化传 源 ，此病给养猪业造成较大 的经济损失 。现从 临床 代 ，接种 713龄 SPF鸡胚 ，收集 卵黄液 ，一20℃保 表现胸膜肺炎病变 的病料 中进行病原分离鉴定 ，以 存。将 3株分离菌分别编号为BZ1株、BZ2株、BZ3株。 期为此病 的预 防、治疗提供 帮助 ，减少养殖业 的 2．2 细菌形态观察 按常规方法对 3株分离菌进 损失 。 行革兰氏染色 ，镜检 ，观察细菌形态。 1 材料 2．3 培养特性试验 1．1 病料 采 自山东地 区几个猪场 3～5月龄病死 2．3．1 培养基适应性 将分离菌接种于普通琼脂 猪的肺脏 、气管 、扁桃体等典型病变组织。病猪死亡 平板、麦康凯琼脂平板 、巧克力琼脂平板 、鲜血琼脂 前表现为体温升高 ，咳嗽 ，呼吸困难 ，迅速死亡 。剖 平板 、TSB培养基 ，37℃有氧条件或 1O％CO 条件 检可见病猪肺脏呈紫红色肝变 ，肺 炎区表面有纤维 下培养 24h，观察 3株细菌在不 同培养基上 的生长 素性附着物 ，胸膜增厚 ，表现为明显 的胸膜肺炎病理 表现及菌落特征 ，同时对培养细菌进行革兰氏染色 、 变化 。 镜检 。 1．2 培养基 副嗜血杆菌培养基 ，购 自青岛某生物 2．3．2 V 因子 (NAD)依赖试验 将 3株分离菌分 技术有限公司。麦康凯琼脂培养基 ，购 自北京某微 别接种于两种液体培养基 ，一种为元 NAD营养 肉 生物培养基厂。胰蛋 白胨大豆肉汤培养基 (TSB)、 汤 ，另一种 为添 加 NAD 的营养 肉汤 ，同时设 不加 三糖铁琼脂培养基 、普通琼脂培养基 、巧克力琼脂培 NAD和细菌的对照管 ，37℃有氧或 1O CO 条件 养基、鲜血琼脂培养基、MR试验培养基 、V—P试验 下培养 24h